Эффективность ферментного препарата на основе нового мутантного штамма Bacillus subtilis-96 при гидролизе белков молочной сыворотки и яичного белка

Резюме

Белки молочной сыворотки и куриного белка характеризуются высокой пищевой ценностью, но при этом они обладают антигенными свойствами, что ограничивает их применение в производстве специализированных пищевых продуктов для диетического питания. Существенному снижению аллергенности белков способствует ферментативный гидролиз, эффективность которого зависит от специфичности используемых протеаз.

Цель работы - определение эффективности ферментного препарата (ФП-96) на основе штамма Bacillus subtilis-96 при гидролизе белков молочной сыворотки и яичного белка в сравнении с коммерческими препаратами бактериальных протеаз - алкалазой, нейтразой и протосубтилином.

Материал и методы. В качестве субстратов использовали концентраты сывороточного и яичного белка. Для гидролиза применяли коммерческие ферментные препараты - алкалазу, нейтразу и протосубтилин, а также опытный образец ферментного препарата на основе нового мутантного штамма Bacillus subtilis-96 с сопоставимыми значениями протеолитической активности. Гидролиз проводили при концентрации субстратов 100 г/дм3 в течение 3 ч при 55 °С или в течение 24 ч при 50 °С. После гидролиза реакционную смесь инкубировали при 90 °С в течение 15 мин для инактивации ферментов. В полученных гидролизатах определяли содержание пептидов с молекулярной массой <10 кДа. Гидролиз основных аллергенных белков оценивали по исчезновению соответствующих белковых полос на электрофореграммах супернатантов гидролизатов.

Результаты. Все исследуемые препараты показали высокую эффективность при гидролизе белков молочной сыворотки и обеспечили выход низкомолекулярных пептидов на уровне 18,8-22,8% через 3 ч гидролиза и 39,4-41,6% через 24 ч. В электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия показано присутствие остаточного количества белка с молекулярной массой около 14 кДа, соответствующей α-лактоальбумину, через 3 ч гидролиза препаратом нейтральной протеазы - нейтразой. Препараты, содержащие сериновую протеазу, в том числе ФП-96, обеспечили более интенсивный гидролиз белков молочной сыворотки. При гидролизе яичного белка нейтраза, наоборот, показала наибольшую эффективность. ФП-96 практически не уступал нейтразе как по выходу низкомолекулярных пептидов, так и по интенсивности расщепления основных аллергенных белков. Эффективность препаратов с превалирующим содержанием сериновой протеазы (алкалазы и протосубтилина) была существенно ниже.

Заключение. Оптимальное соотношение нейтральной и сериновой протеаз в составе препарата ФП-96, полученного на основе нового отечественного продуцента протеаз B. subtilis-96, обеспечивает высокую эффективность и универсальность его действия при гидролизе белков молочной сыворотки и яичного белка. Рекомендованы параметры технологии гидролиза с препаратом ФП-96, обеспечивающие интенсивное преобразование основных иммуногенных белков молочной сыворотки и белка куриного яйца до растворимых и низкомолекулярных фракций (продолжительность 3 ч при температуре 55 °С и дозировке препарата не менее 2 ед протеолитической активности на 1 г субстрата) и повышение эффективности последующей ультрафильтрации при получении белковых гидролизатов, включаемых в состав специализированных пищевых продуктов.

Ключевые слова:белок молочной сыворотки; белок куриного яйца; протеазы; гидролиз

Финансирование. Научно-исследовательская работа по подготовке рукописи проведена за счет средств субсидии на выполнение государственного задания в рамках Программы фундаментальных научных исследований государственных академий наук на 2022-2024 гг. (тема № 0410-2022-0006).

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Для цитирования: Костылева Е.В., Середа А.С., Великорецкая И.А., Минеева Д.Т., Цурикова Н.В. Эффективность ферментного препарата на основе нового мутантного штамма Bacillus subtilis-96 при гидролизе белков молочной сыворотки и яичного белка // Вопросы питания. 2022. Т. 91, № 2. С. 72-80. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2022-91-2-72-80

Белки куриного яйца (БКЯ) и молочной сыворотки характеризуются высокой пищевой ценностью и оптимальным аминокислотным составом, они широко используются для производства белковых гидролизатов, предназначенных для создания специализированных пищевых продуктов для диетического лечебного и профилактического питания [1-3].

Белки молочной сыворотки представлены главным образом β-лактоглобулином с молекулярной массой (ММ) около 18,3 кДа (как правило, в виде димера с ММ 35-40 кДа), α-лактальбумином с ММ 14,2 кДа и бычьим сывороточным альбумином с ММ 66,4 кДа. Также к сывороточным белкам относятся лактоферрин с ММ 80 кДа (составляет <3% сывороточных белков) и иммуноглобулины, общее содержание которых не превышает 10% [4, 5]. Наибольшее значение для пищевой промышленности имеют β-лактоглобулин и α-лактальбумин, доля которых в сывороточных белках составляет в среднем 70-80%. Аминокислотный состав этих белков наиболее близок к аминокислотному составу мышечной ткани человека, а по содержанию незаменимых аминокислот и аминокислот с разветвленной цепью (валина, лейцина и изолейцина) они превосходят все остальные белки животного и растительного происхождения и считаются "золотым стандартом" белка в специализированном питании [4-6].

Главными компонентами БКЯ являются овальбумин с ММ 45 кДа (составляет около 54% от всех белков БКЯ), кональбумин, называемый также овотрансферрином, с ММ 77,9 кДа (12%), овомукоид с ММ 28 кДа (11%), лизоцим с ММ 14,3 кДа и овомуцин с ММ растворимой части 8,3 кДа, нерастворимой - 23 кДа (по 3,5% от всех БКЯ) [7-11]. Яичный белок отличается высоким содержанием аминокислот с разветвленной цепью и серосодержащих аминокислот, его аминокислотный скор составляет 100, чистая утилизация белка - 97%. Яичный белок снижает уровень холестерина, способствует усвоению железа и увеличению мышечной массы, благодаря чему его часто используют в спортивном питании [12, 13].

Основные белки молочной сыворотки и яичного белка обладают выраженными антигенными свойствами, что ограничивает их применение в производстве диетических продуктов [5, 14, 15]. Для снижения или устранения антигенности наиболее часто используют сочетание ферментативного гидролиза с технологией мембранной ультрафильтрации и/или нанофильтрации или термообработкой [16]. При этом ключевым этапом большинства известных технологий получения белковых гидролизатов для специализированных пищевых продуктов является ферментативный гидролиз, в результате которого антигенность снижается на несколько порядков по сравнению с исходным белком [17]. Так, в работе С.Н. Зорина и соавт. обработка концентрата белков молочной сыворотки панкреатином позволила снизить аллергенность в 2,3×103 раз, а алкалазой - в 4,7×104 раз [16]. В исследованиях S. Hildebrandt и соавт. в результате комбинированной обработки яичного белка протеазами и нагреванием иммунореактивность яичного белка была полностью устранена [8].

Помимо гипоаллергенности, гидролизаты в сравнении с нативными белками обладают улучшенными физиологическими и физико-химическими свойствами: они легче усваиваются, что снижает нагрузку на пищеварительную систему, растворимы в широком диапазоне рН и термоустойчивы [18, 19]. В результате гидролиза основных белков молочной сыворотки и БКЯ образуются биоактивные пептиды, проявляющие антимикробные, гипотензивные, иммуностимулирующие и антиоксидантные свойства, что повышает биологическую ценность гидролизатов [19, 20].

Для получения белковых гидролизатов используют ферментные препараты (ФП) животного, растительного и микробного происхождения. От выбора ФП во многом зависит экономическая эффективность процесса и качество получаемых гидролизатов. Для получения частичных гидролизатов (со средней степенью гидролиза) широко применяют ФП бактериальных протеаз. В ряде экспериментов по гидролизу БКЯ и молочной сыворотки отечественные и зарубежные исследователи успешно использовали ФП сериновой протеазы (алкалазу) и ФП нейтральной протеазы (нейтразу) [2, 4, 16, 19, 21, 22]. В некоторых экспериментах по гидролизу молочных белков использовали отечественный препарат протосубтилин, включающий сериновую и нейтральную протеазу и предназначенный для применения в кормопроизводстве [20, 23].

Ранее из коллекции промышленных продуцентов протеаз ВНИИПБТ нами был выбран штамм Bacillus subtilis 18 № 359, синтезирующий нейтральную протеазу бациллолизин и сериновую протеазу субтилизин BPN’ в оптимальном соотношении, что обеспечивает эффективный гидролиз белковых субстратов с получением гидролизатов со сниженной горечью [24]. На основе B. subtilis 18 № 359 в результате 2 этапов ультрафиолетового мутагенеза и одного этапа гамма-облучения нами был получен штамм B. subtilis-96 с увеличенной более чем в 2 раза общей протеолитической активностью при сохранении соотношения основных компонентов протеолитического комплекса [24].

Цель исследования - определение эффективности ФП на основе нового штамма B. subtilis-96 при гидролизе белков молочной сыворотки и яичного белка в сравнении с коммерческими ФП бактериальных протеаз - алкалазой, нейтразой и протосубтилином.

Материал и методы

В качестве белковых субстратов использовали концентрат сывороточного белка (КСБ) ("ООО Миксэм", РФ) с содержанием белка 80%; концентрат яичного белка (АО "Птицефабрика Роскар", РФ) по ГОСТ 30363-2013 с содержанием белка 85%.

В работе использовали коммерческие ФП Алкалазу 2,4L и Нейтразу 0,8L (Novozymes A/S, Дания) и Протосубтилин (ООО ПО "С иббиофарм", РФ) с общей протеолитической активностью, определенной в соответствии с ГОСТ 20264.2-88 "Препараты ферментные. Методы определения протеолитической активности" (30 °С, рН 7,2), соответственно 400±30, 220±15 и 250±15 ед/мл (г). Препараты алкалаза и нейтраза рекомендованы производителем (Novozymes A/S) для применения в пищевой промышленности, в том числе для гидролиза белков молочной сыворотки и БКЯ. Протосубтилин предназначен для применения в кормопроизводстве, однако он был взят в исследование, так как является на данный момент единственным отечественным препаратом бактериальных протеаз. ФП хранили в соответствии с рекомендациями производителей - при 4 °С в пределах срока годности.

Лабораторный образец концентрированного ФП на основе B. subtilis-96 с общей протеолитической активностью 382±20 ед/г (ГОСТ 20264.2-88) был получен в результате распылительной сушки супернатанта культуральной жидкости штамма B. subtilis-96.

Гидролиз проводили в термостатируемом шейкере "New Brunswick Innova® 40/40R" (Eppendorf, Германия) с перемешиванием (250 об/мин) при концентрации субстратов 100 г/л. Дозировка ФП составляла 2 ед. протеолитической активности, определенной по ГОСТ 20264.2-88, на 1 г субстрата, что соответствует 1% ФП Алкалаза/г субстрата. Гидролиз КСБ проводили при рН 6,2 в течение 3 ч при 55 °С или 24 ч при 50 °С. Перед гидролизом раствор КСБ инкубировали 20 мин при 80 °С для повышения атакуемости белка протеазами.

Гидролиз БКЯ проводили при рН 6,0 в течение 3 ч при 55 °С или 24 ч при 50 °С. Предобработку субстрата проводили инкубированием раствора БКЯ при 45 °С в течение 20 мин, согласно методике, разработанной D.Y. Cho и соавт. [21].

Для предотвращения микробной контаминации в вариантах с длительным гидролизом (24 ч) в реакционную смесь вносили 0,1% 0,59 М раствора ампициллина. Для инактивации и снижения антимикробной активности ампициллина к концу эксперимента применяли термообработку в течение 15 мин при 90 °С и инкубирование реакционной смеси при повышенной температуре (50 °С) в течение 24 ч. Удаление остаточных количеств ампициллина проверяли путем титрования полученных гидролизатов на чашках Петри с тест-культурой (суспензия спор Bacillus subtilis) по отсутствию влияния на интенсивность роста микроорганизма.

Следует отметить, что применение ампициллина представляется возможным только в лабораторной практике при проведении длительных экспериментов и не планируется в производственных условиях.

После гидролиза реакционную смесь инкубировали при 90 °С в течение 15 мин для инактивации ферментов. Данный режим обеспечивает отсутствие протеолитической активности в реакционной смеси. Далее гидролизаты центрифугировали при 10 750g в течение 5 мин. В полученных супернатантах определяли содержание низкомолекулярного белка (НМБ) с ММ <10 кДа. Для этого из супернатантов удаляли белковую фракцию с ММ выше 10 кДа, используя для этого 20% раствор трихлоруксусной кислоты, осадок отделяли центрифугированием и в полученном растворе определяли концентрацию белка по методу Лоури. Содержание НМБ выражали в процентах по отношению к концентрации общего белка в субстрате.

Содержание общего белка в реакционной смеси и надосадочной жидкости при гидролизе белковых субстратов определяли методом Кьельдаля по ГОСТ 23327-98 "Молоко и молочные продукты. Метод измерения массовой доли общего азота по Кьельдалю и определение массовой доли белка".

Статистическую обработку результатов, полученных не менее чем в 3 повторностях, проводили, используя программу Excel Microsoft.

Электрофоретический анализ белков супернатантов полученных гидролизатов проводили в 12% (для гидролизатов БКЯ) или 15% (для гидролизатов КСБ) полиакриламидном геле, приготовленном на буфере, содержащем 25 мМ трис-глицин, pH 8,3 и додецилсульфат натрия (ДДС-Na) в концентрации 1 мг/см3, в системе Mini Protean Tetra System (Bio-Rad, США). Гель окрашивали кумасси бриллиантовым синим G-250 (Amresco, США).

Результаты и обсуждение

В исследованиях по получению белковых гидролизатов из яичного и молочного белка наиболее часто используют ФП Алкалаза 2,4L и Нейтраза 0,8L. Так, применение нейтразы было наиболее эффективно при получении из молочной сыворотки биоактивных пептидов, способствующих усвоению железа [22], алкалазу успешно использовали для получения из молочной сыворотки пептидов, обладающих антиоксидантными и противовоспалительными свойствами [25, 26]. Эти ФП использовали для получения на основе КСБ гидролизатов, обладающих различными физико-химическими свойствами [27]. При гидролизе яичного белка данные ФП также показывали высокую эффективность [2, 21]. Так, по сравнению с различными другими ФП (флавозим, протамекс, нейтраза, фицин, коллупулин) алкалаза показала наибольшую эффективность по выходу аминного азота и степени гидролиза яичного белка при рН 6,0 и 50 °С [2].

Все исследуемые ФП достаточно эффективно гидролизовали белки молочной сыворотки (табл. 1, рис. 1). Уже через 3 ч гидролиза основные белки-аллергены КСБ: β-лактоглобулин и α-лактальбумин, были практически полностью прогидролизованы до низкомолекулярных пептидов. Исследуемые ФП обеспечивали выход низкомолекулярных продуктов гидролиза на уровне 18,8-22,8% через 3 ч гидролиза и 39,4-41,6% через 24 ч. Различия между вариантами по выходу НМБ при длительном гидролизе не превышали 6%, при кратковременном - 10%.

Рис. 1. Электрофореграмма продуктов кратковременного - 3 ч (А) и длительного - 24 ч (Б) гидролиза концентрата сывороточного белка

М - молекулярный маркер; 1 - контроль (без гидролиза); 2 - обработка алкалазой; 3 - обработка протосубтилином; 4 - обработка нейтразой; 5 - обработка ФП-96.

Fig. 1. Electropherogram of the products of short-term - 3 h (A) and long-term - 24 h (B) hydrolysis of whey protein concentrate

M - molecular marker; 1 - control (without hydrolysis); 2 - treatment with Alcalase; 3 - treatment with Protosubtilin; 4 - treatment with Neutrase; 5 - treatment with EP-96.

Таблица 1. Содержание низкомолекулярного белка (пептидов с молекулярной массой <10 кДа) в гидролизатах концентрата сывороточного белка, % к общему белку

Table 1. The content of low molecular weight protein (peptides with molecular weight <10 kDa) in whey protein concentrate hydrolysates, % of total protein

Известно, что основными компонентами наиболее широко используемых в промышленности препаратов бактериальных протеаз являются щелочные сериновые протеазы - субтилизины и/или нейтральные металлопротеазы - бациллолизины. Они обладают различной специфичностью действия, что, в свою очередь, определяет глубину и эффективность гидролиза, а также свойства получаемых продуктов гидролиза [21, 23]. Использованные в нашем эксперименте ФП характеризуются различным соотношением сериновой и нейтральной протеазы. В Алкалазе присутствует только сериновая протеаза, в Нейтразе - только нейтральная металлопротеаза, Протосубтилин и ФП-96 содержат сериновую и металлопротеазу в различных соотношениях [23]. Несмотря на незначительную разницу в эффективности гидролиза КСБ при использовании разных ФП, можно отметить незначительную тенденцию к более высокому содержанию НМБ в гидролизатах с увеличением доли сериновой протеазы в ФП (см. табл. 1).

Данные ДДС-электрофореза показывают (см. рис. 1), что после 3 ч гидролиза нейтразой в гидролизате присутствовало остаточное количество белков с ММ около 14 кДа, соответствующей α-лактальбумину. Присутствие сериновой протеазы в ФП-96 обеспечило более высокую эффективность его действия при гидролизе КСБ по сравнению с нейтразой - на уровне алкалазы и протосубтилина.

При гидролизе яичного белка наблюдалась обратная зависимость, причем специфичность протеаз значительно влияла на эффективность гидролиза (табл. 2, рис. 2): алкалаза в наименьшей степени гидролизовала яичный белок, нейтраза и ФП-96 наиболее быстро и эффективно расщепляли основные аллергенные белки и обеспечивали высокий выход НМБ. Выход НМБ при использовании ФП-96, полученного на основе нового мутантного штамма B. subtilis-96, после 3 ч гидролиза на 80% превышал результат, полученный при использовании алкалазы, и на 10,5% - результат, полученный в варианте гидролиза с протосубтилином. При длительном гидролизе (в течение 24 ч) эффективность ФП-96 по выходу НМБ на 40% превышала эффективность алкалазы и на 14,4% протосубтилина. При этом ФП-96 практически не уступал нейтразе - при кратковременном гидролизе эффективность ФП-96 по выходу НМБ составляла 89% по отношению к эффективности нейтразы, а при длительном гидролизе - 93%.

Рис. 2. Электрофореграмма продуктов кратковременного - 3 ч (А) и длительного - 24 ч (Б) гидролиза белка куриного яйца

М - молекулярный маркер; 1 - контроль (без гидролиза); 2 - обработка алкалазой; 3 - обработка нейтразой; 4 - обработка протосубтилином; 5 - обработка ФП-96.

Fig. 2. Electropherogram of the products of short-term - 3 h (A) and long-term - 24 h (B) hydrolysis of egg white protein

M - molecular marker; 1 - control (without hydrolysis); 2 - treatment with Alcalase; 3 - treatment with Protosubtilin; 4 - treatment with Neutrase; 5 - treatment with EP-96.

Таблица 2. Содержание низкомолекулярного белка (пептидов с молекулярной массой <10 кДа) в гидролизатах белка куриного яйца, % к общему белку

Table 2. The content of low molecular weight protein (peptides with molecular weight <10 kDa) in egg protein hydrolysates, % of total protein

Из данных рис. 2 очевидно, что основная часть яичного белка представлена овальбумином с ММ 45 кДа. За 3 ч гидролиза расщепляется основная часть овальбумина, лишь в варианте с алкалазой полоса около 45 кДа осталась достаточно интенсивной и наблюдалось большое количество промежуточных продуктов гидролиза овальбумина с ММ выше 10 кДа. Во всех вариантах, кроме алкалазы, следует отметить быстрое исчезновение белковой полосы выше 66,2 кДа, предположительно, соответствующей кональбумину с ММ 77,7 кДа.

Через 24 ч гидролиза в варианте с ФП-96 наблюдались две слабые полосы нерасщепленного белка на уровне 40-45 кДа, в варианте с нейтразой - более интенсивная полоса с ММ около 45 кДа, в варианте с протосубтилином в гидролизате присутствовало заметно больше нерасщепленного белка и продуктов частичного гидролиза с ММ 35-45 кДа. В варианте с использованием алкалазы, помимо полос на уровне 40-45 кДа, наблюдалось большое количество промежуточных продуктов гидролиза с ММ более 10 кДа. Данные рис. 2 свидетельствуют о том, что наиболее интенсивно аллергенные белки прогидролизовались в вариантах с использованием ФП-96 и нейтразы.

Данные по соотношению содержания общего белка в осадочных фракциях и супернатантах полученных гидролизатов (рис. 3) показали, что достаточно большое количество белка КСБ находилось в растворимой форме. В наибольшей степени содержание белка в осадочной фракции снизилось в результате обработки ФП, содержащими сериновую протеазу: алкалазой, протосубтилином, ФП-96 - содержание белка в нерастворенной форме в данных вариантах уже через 3 ч гидролиза сокращается на 40-45% по отношению к контролю (без ФП). Наименее эффективной при гидролизе нерастворимых белков КСБ оказалась нейтраза, при использовании которой концентрация белка в осадке снизилась только на 24%.

Рис. 3. Содержание общего белка в осадке и в супернатантах гидролизатов концентрата сывороточного белка, полученных в результате кратковременного (А) и длительного (Б) гидролиза

I - контроль (без гидролиза); II - ФП-96; III - алкалаза; IV - нейтраза; V - протосубтилин.

Fig. 3. The content of total protein in the sediment and supernatants of hydrolysates of whey protein concentrate obtained as a result of short-term (a) and long-term (b) hydrolysis

I - control (without hydrolysis); II - EP-96; III - Alcalase; IV - Neutrase; V - Protosubtilin.

После термоинактивации ферментов в гидролизатах БКЯ содержится значительно больше нерастворимого белка по сравнению с гидролизатами КСБ. Из полученных данных (рис. 4) видно, что в наибольшей степени переходу нерастворимых белков БКЯ в супернатант способствовали препараты, содержащие нейтральную металлопротеазу, - нейтраза и ФП-96. Количество нерастворимого белка после 3 ч обработки БКЯ данными препаратами снизилось более чем на 30%. Наименее эффективен был препарат сериновой протеазы - алкалаза, при использовании которого в растворимой фракции оказалось менее 50% белка как через 3 ч, так и через 24 ч гидролиза.

Рис. 4. Содержание общего белка в осадке и супернатантах гидролизатов белка куриного яйца, полученных в результате кратковременного (А) и длительного (Б) гидролиза

I - контроль (без гидролиза); II - ФП-96; III - алкалаза; IV - нейтраза; V - протосубтилин.

Fig. 4. The content of total protein in the sediment and supernatants of hydrolysates of egg white protein obtained as a result of short-term (a) and long-term (b) hydrolysis

I - control (without hydrolysis); II - EP-96; III - Alcalase; IV - Neutrase; V - Protosubtilin.

Таким образом, на основании полученных данных и с учетом экономической целесообразности для процесса гидролиза белков молочной сыворотки и БКЯ препаратом ФП-96 на основе нового отечественного продуцента протеаз можно рекомендовать ускоренный гидролиз в течение 3 ч при температуре 55 °С для исключения необходимости внесения антибиотиков, при дозировке препарата из расчета 2 ед протеолитической активности на 1 г субстрата. Данные параметры процесса обеспечивают интенсивное преобразование основных иммуногенных белков молочной сыворотки и БКЯ, увеличение содержания растворимых и низкомолекулярных белковых фракций в гидролизатах, что повысит эффективность ультрафильтрации при получении белковых гидролизатов, включаемых в состав специализированных пищевых продуктов.

Выбранные параметры позволят при обработке КСБ получить гидролизаты, содержащие более 90% растворимого белка, в том числе более 20% низкомолекулярных пептидов. В гидролизатах БКЯ растворимый белок составляет около 55%, более 30% белка представлено низкомолекулярными пептидами.

Заключение

Результаты исследований показали высокую эффективность ФП-96, полученного на основе нового мутантного штамма B. subtilis-96, при гидролизе основных белков молочной сыворотки и яичного белка, обладающих сильным антигенным действием. Оптимальное соотношение нейтральной и сериновой протеаз в составе ФП-96 обеспечило универсальность действия препарата при гидролизе исследуемых белковых субстратов. Полученные данные свидетельствуют о целесообразности проведения дальнейших исследований по применению ФП-96 на этапе ферментативной обработки концентратов сывороточного и яичного белка в различных технологиях получения белковых гидролизатов для специализированных пищевых продуктов для диетического (лечебного и профилактического) питания.

Литература

1. Janser R., Sato H. A response surface approach on optimization of Hydrolysis parameters for the production of egg white protein hydrolysates with antioxidant activities // Biocatal. Agric. Biotechnol. 2015. Vol. 4. P. 55-62. DOI: https://doi.org/10.1016/j.bcab.2014.07.001

2. Noh D.O., Suh H.J. Preparation of egg white liquid hydrolysate (ELH) and its radical-scavenging activity // Prev. Nutr. Food Sci. 2015. Vol. 20, N 3. P. 183-189. DOI: https://doi.org/10.3746/pnf.2015.20.3.183

3. Зорин С.Н. Ферментативные гидролизаты пищевых белков для специализированных пищевых продуктов диетического (лечебного и профилактического) питания // Вопросы питания. 2019. Т. 88, № 3. С. 23-31. DOI: https://doi.org/10.24411/0042-8833-2019-10026

4. Corrochano A.R., Buckin V., Kelly P.M., Giblin L. Invited review: whey proteins as antioxidants and promoters of cellular antioxidant pathways // J. Dairy Sci. 2018. Vol. 6. P. 4747-4761. DOI: https://doi.org/10.3168/jds.2017-13618

5. Рытченкова О.В., Красноштанова А.А. Оптимизация процесса получения ферментативных гидролизатов белков молочной сыворотки с применением протеолитических ферментов // Фундаментальные исследования. 2011. Т. 8, № 3. С. 663-666.

6. Токаев Э.С., Баженова Е.Н., Мироедов Р.Ю. Современный опыт и перспективы использования препаратов сывороточных белков в производстве функциональных напитков // Молочная промышленность. 2007. № 10. С. 55-56.

7. Benedé S., Molina E. Chicken egg proteins and derived peptides with antioxidant properties // Foods. 2020. Vol. 9, N 6. P. 735. DOI: https://doi.org/10.3390/foods9060735

8. Hildebrandt S., Kratzin H.D., Schaller R., Fritsché R., Steinhart H., Paschke A. In vitro determination of the allergenic potential of technologically altered hen’s egg // J. Agric. Food Chem. 2008. Vol. 12, pt 56. N 5. P. 1727-1733. DOI: https://doi.org/10.1021/jf0725981

9. Graszkiewicz A., Żelazko M., Trziszka T. Application of pancreatic enzymes in hydrolysis of egg-white proteins // Pol. J. Food Nutr. Sci. 2010. Vol. 60, N 1. P. 57-61.

10. Sujith P., Hymavathi T. Recent developments with debittering of protein hydrolysates // Asian J. Food Agro-Ind. 2011. Vol. 4, N 6. P. 365-381.

11. Omana D.A., Wang J., Wu J. Ovomucin - a glycoprotein with promising potential // Trends Food Sci. Technol. 2010. Vol. 21, N 9. P. 455-463. DOI: https://doi.org/10.1016/j.tifs.2010.07.001

12. Matsuoka R., Takahashi Y., Kimura M., Masuda Y., Kunou M. Heating has no effect on the net protein utilisation from egg whites in rats // Sci. World J. 2017. Vol. 2017. Article ID 6817196. DOI: https://doi.org/10.1155/2017/6817196

13. Matsuoka R., Kimura M., Uno S., Shidara H., Kunou M. Egg white hydrolysate improves fatigue due to short-term swimming load test in mice // Food Sci. Nutr. 2018. Vol. 6, N 8. P. 2314-2320. DOI: https://doi.org/10.1002/fsn3.810

14. Caira S., Pizzano R., Picariello G., Pinto G., Cuollo M., Chianese L., Addeo F. Allergenicity of milk proteins // Milk Protein / ed. W.L. Hurley. London : IntechOpen, 2012. URL: https://www.intechopen.com/chapters/38834 DOI: https://doi.org/10.5772/52086

15. Shin M., Han Y., Ahn K. The influence of the time and temperature of heat treatment on the allergenicity of egg white proteins // Allergy Asthma Immunol. Res. 2013. Vol. 5, N 2. P. 96-101. DOI: https://doi.org/10.4168/aair.2013.5.2.96

16. Зорин С.Н., Сидорова Ю.С., Мазо В.К. Ферментативные гидролизаты белков молочной сыворотки и куриного яйца: получение, физико-химическая и иммунохимическая характеристики // Вопросы питания. 2020. Т. 89. № 1. С. 64-68. DOI: https://doi.org/10.24411/0042-8833-2020-10007

17. Зорин С.Н., Петров Н.А., Борисов А.Ю. Ферментолизаты белка молочной сыворотки: получение, физико-химическая и иммунохимическая характеристика // Пищевая промышленность. 2019. № 4. С. 41-43.

18. Свириденко Ю.Я., Мягконосов Д.С., Абрамов Д.В., Овчинникова Е.Г. Научно-методические подходы к развитию технологии белковых гидролизатов для специального питания. Часть 1. Технология производства и технические характеристики гидролизатов // Пищевая промышленность. 2017. № 5. С. 48-51.

19. Pokora M., Eckert E., Zambrowicz A., Bobak Ł., Szołtysik M., Dąbrowska A. et al. Biological and functional properties of proteolytic enzyme-modified egg protein by-products // Food Sci. Nutr. 2013. Vol. 1, N 2. P. 184-195. DOI: https://doi.org/10.1002/fsn3.27

20. Головач Т.Н., Курченко В.П. Гидролиз белков молока ферментативными препаратами и протеолитическими системами молочнокислых бактерий // Труды БГУ. 2012. Т. 7, ч. 1. С. 106-126.

21. Cho D.Y., Jo K., Cho S.Y., Kim J.M., Lim K., Suh H.J. et al. Antioxidant effect and functional properties of hydrolysates derived from egg-white protein // Korean J. Food Sci. Anim. Resour. 2014. Vol. 34, N 3. P. 362-371. DOI: https://doi.org/10.5851/kosfa.2014. 34.3.362

22. Ou K., Liu Y., Zhang L., Yang X., Huang Z., Nout M.J. et al. Effect of neutrase, alcalase, and papain hydrolysis of whey protein concentrates on iron uptake by Caco-2 cells // J. Agric. Food Chem. 2010. Vol. 58, N 8. P. 4894-4900. DOI: https://doi.org/10.1021/jf100055y

23. Костылева Е.В., Середа А.С., Великорецкая И.А., Минеева Д.Т., Цурикова Н.В., Рубцова Е.А. Ферментные препараты бактериальных протеаз для получения белковых гидролизатов без горечи // Биотехнология. 2020. Т. 36, № 4. С. 42-48. DOI: https://doi.org/10.21519/0234-2758-2020-36-4-42-48

24. Костылева Е.В., Середа А.С., Великорецкая И.А., Цурикова Н.В., Минеева Д.Т., Бобровенко Е.Ю. Получение нового штамма Bacillus subtilis-96 - продуцента протеолитических ферментов для пищевой промышленности // Пищевая промышленность. 2021. № 9. С. 35-36. DOI: https://doi.org/10.52653/PPI.2021.9.9.012

25. Peng X., Kong B., Xia X., Liu Q. Reducing and radical-scavenging activities of whey protein hydrolysates prepared with Alcalase // Int. Dairy J. 2010. Vol. 20, N 5. P. 360-365. DOI: https://doi.org/10.1016/j.idairyj.2009.11.019

26. Carvalho-Silva L.D., Pacheco M.T., Bertoldo R., Veloso C.D., Teodoro L.O., Giusti-Paiva A. et al. Anti-inflammatory activities of enzymatic (alcalase) hydrolysate of a whey protein concentrate // Afr. J. Biotechnol. 2012. Vol. 11, N 12. P. 2993-2999. DOI: https://doi.org/10.5897/AJB11.2330

27. Dermiki M., Fitzgerald R.J. Physicochemical and gelling properties of whey protein hydrolysates generated at 5 and 50°C using Alcalase® and Neutrase®, effect of total solids and incubation time // Int. Dairy J. 2020. Vol. 110. Article ID 104792. DOI: https://doi.org/10.1016/j.idairyj.2020.104792

SCImago Journal & Country Rank
Scopus CiteScore
ГЛАВНЫЙ РЕДАКТОР
ГЛАВНЫЙ РЕДАКТОР
Тутельян Виктор Александрович
Академик РАН, доктор медицинских наук, профессор, научный руководитель ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии»
Индустрия и медицина 2022
Оргздрав-2022. Эффективное управление в здравоохранении
РОСМЕДОБР 2021
Вскрытие
Медицина сегодня
Летний конгресс по пластической хирургии.

Уважаемые коллеги, запланируйте свою поездку в Санкт-Петербург на Летний конгресс - 2022 с 1 по 3 июня Бронируйте размещение и планируйте поездку к началу Летнего конгресса - 2022. Площадка мероприятия - Таврический дворец (Шпалерная ул., 47) - Начало регистрации на...

X Юбилейный международный междисциплинарный конгресс по заболеваниям органов головы и шеи.

25-28 мая 2022 года состоится X Юбилейный международный междисциплинарный конгресс по заболеваниям органов головы и шеи. Мероприятие пройдет в очном формате . Участников Конгресса ожидает насыщенная программа: 60 секций, посвященных диагностике и лечению различных...

VIII Научно-практическая онлайн-конференция педиатров "Трудный диагноз: разбор клинических случаев"

VII I Научно-практическая онлайн-конференция педиатров "Трудный диагноз: разбор клинических случаев" Приглашаем педиатров, детских эндокринологов, реаниматологов, гинекологов, неонатологов, кардиологов, хирургов, урологов, психологов, специалистов по лучевой диагностике,...


Журналы «ГЭОТАР-Медиа»