Постоянный рост у населения числа острых кишечных заболеваний вынуждает контролировать пищевые продукты и сырье на возможность их загрязнения патогенными микроорганизмами, в частности бактериями рода сальмонелла (Salmonella spp.). Сальмонеллез - широко распространенное пищевое заболевание с фекально-оральным механизмом передачи. Он относится к наиболее опасным кишечным инфекциям человека и сельскохозяйственных животных. У человека сальмонеллез проявляется в виде пищевых токсикоинфекций, сопровождающихся воспалением слизистой оболочки тонкой кишки (энтероколит) и обезвоживанием организма. Загрязненные пищевые продукты, сырье, а также вода рассматриваются как основные источники и факторы передачи возбудителя [1].
В 2006-2009 гг. в странах ЕС выявлено достоверное увеличение числа случаев обнаружения сальмонелл в мясе птицы [17]. В России в 2010 г. Роспотребнадзор резко усилил микробиологический контроль животноводческой продукции из-за ее потенциального загрязнения сальмонеллами [18, 19, 21]. Так, выявлено [9], что в Приморском крае основным источником сальмонеллезной инфекции является птица, выращиваемая на местных предприятиях промышленного птицеводства. Заболеваемость сальмонеллезом населения Пензенской области за 2004-2009 гг. возросла втрое (с 12,8 до 37,8 случая на 100 тыс. населения) [18]. В США на долю сальмонеллеза приходится около 9% пищевых инфекций [8], причем значительная часть населения - бессимптомные бактерионосители сальмонеллеза. Ежегодно это заболевание регистрируется у 1,4 млн жителей США, а материальные затраты, связанные с его последствиями и профилактикой, оцениваются в 1-2,3 млрд долларов в год. Согласно ВОЗ [16], в мире ежегодно регистрируется до 1,3 млрд случаев сальмонеллеза, при этом динамика заболеваемости населения имеет тенденцию к росту. При отсутствии эффективного лечения сальмонеллеза частота летальных случаев у людей составляет от 1-3 до 10-15% [2, 8, 15, 18].
Очевидно, что комплексные профилактические мероприятия, исключающие распространение сальмонеллезной пищевой токсикоинфекции, должны базироваться на достоверной информации об источниках возбудителя, путях его передачи, сроках выживания бактерий в различных продуктах и средах, а также на эффективных методах выявления патогена в объектах эпидемиологического риска [1, 19].
Краткая характеристика возбудителей сальмонеллеза, источники и переносчики инфекции
Сальмонеллы повсеместно распространены в природе. Они обитают в организме человека и разных животных, загрязняют пищевые продукты и корма, а также объекты внешней среды [1, 2]. Род Salmonella, насчитывающий свыше 2500 сероваров (серотипов) этих бактерий, входит в семейство Enterobacteriaceae; большинство из их патогенные для человека. Согласно современной классификации, основанной на ДНК-анализе, род Salmonella включает патогенный для человека и теплокровных животных вид S. enterica. Этот вид разделен на несколько подвидов: подвид S. enterica subsp. Enteritidis - возбудитель пищевых токсикоинфекций, и подвиды S. enterica subsp. Typhi, S. enterica subsp. Paratyphi A, B - возбудители у людей брюшного тифа, паратифов А и В [1, 13].
По данным мониторинга, сальмонеллы обнаруживаются в 80-100% проб сточных вод мясоперерабатывающих предприятий и в 33-95% проб очищенных сточных вод. В воде открытых водоемов и почве бактерии сохраняются до 4-9 мес [1]. Наличие сальмонелл в воде или почве всегда свидетельствует о загрязнении этих сред испражнениями инфицированных людей или животных - птиц, крупного рогатого скота, свиней, кошек, собак, голубей, рыб, черепах, рептилий [18]. Инфицированность сальмонеллами отдельных групп этих животных колеблется от 6-7 до 80% [7, 12, 15, 20].
В пищевое сырье и корма бактерии попадают с загрязненной почвой или водой. Из загрязненного сырья патоген переходит в пищевые продукты. Загрязненные птицепродукты, мясо и мясные продукты, молоко, сыр, сливочное масло, овощи и фрукты, полуфабрикаты и приправы (майонез, яичный порошок, кремы и др.), а также питьевая вода - основные источники сальмонеллеза. Пищевые продукты контаминируются бактериями также в процессе кулинарной обработки, контактируя с бактерионосителями, производственным оборудованием, животными-переносчиками (мухи, мышевидные грызуны, комнатные животные) [10]. Продолжительность жизнеспособности сальмонелл зависит от вида продукции и среды обитания. Так, бактерии выживают: на поверхности овощей и фруктов в течение 5-10 дней, в молоке - 20 дней, в пиве и кефире - 2 мес, в колбасных изделиях и мясе (включая соленое) - 2-6 мес, в сливочном масле - 4 мес, в сырах - 1 год, в замороженном мясе - 2-3 года [2]. Одним из факторов передачи возбудителя человеку является способность бактерий развиваться в тканях яичников кур и инфицировать яйца при отсутствии клинических признаков патологии у животных - носителей инфекции [8]. Сальмонеллы хорошо переносят низкие температуры и высушивание, выдерживают нагревание при 75 °С в течение 30 мин [2, 13, 20]. Соление и копчение продуктов практически не влияют на их жизнеспособность [10].
Инфекционная доза сальмонелл определяется возрастом и состоянием организма хозяина, а также видом (подвидом) патогена и его устойчивостью к различным факторам (антибиотикам и др.). По одним данным эта доза составляет всего 15-20 клеток на человека [15], по другим - более 100 тыс. клеток [1, 7]. Известны случаи заболевания сальмонеллезом и даже вспышки заболевания среди населения, когда заражающая доза не превышала нескольких десятков бактерий [10].
Стандартные (классические) методы выявления сальмонелл
При классическом (стандартном) анализе выявления сальмонелл в пищевом продукте руководствуются действующим ГОСТ Р 52814-2007 (ISO 6579:2002) [4, 25]. Стандартный метод (рис. 1) выполняется в строгом соответствии с требованиями техники безопасности, предусмотренными санитарными правилами при работе с микроорганизмами IV группы патогенности (CП 1.3.2322-08). Особенности отбора проб пищевых продуктов для анализа, методы их транспортировки и подготовки к исследованиям описаны в методических указаниях [10]. Кратность производственного микробиологического контроля различных пищевых продуктов на содержание сальмонелл проводится в соответствии с требованиями санитарных правил [19].
Предварительное обогащение в неселективной жидкой среде. Используемая для предобогащения сальмонелл забуференная пептонная вода богата питательными веществами, что обеспечивает интенсивный рост даже угнетенных бактерий. Фосфатный буфер стабилизирует рН среды и оптимизирует рост сальмонелл. Соотношение между массой исследуемого продукта (здесь и далее - 25 г) и объемом среды должно быть 1:10. При анализе отдельных пищевых продуктов (сыр, шоколад, конфеты, мед, специи и др.) на этапе предобогащения используют забуференную пептонную воду или иную питательную среду [24]. Модифицированная пептонная вода и специальные среды позволяют нейтрализовать ингибирующее действие самого продукта. Так, при исследовании шоколада необходимо проводить неселективное обогащение на среде с обезжиренным стерильным молоком, нейтрализующим антимикробное действие какао.
При исследовании продукции, содержащей лук или чеснок, в пептонную воду вводят сульфит калия, нейтрализующий ингибирующее действие этих овощей. В противном случае при выявлении сальмонелл в подобных продуктах высока вероятность получения ложноотрицательных результатов. При исследовании сальмонелл предварительное обогащение образца удобнее проводить в закрывающихся пластиковых пакетах. Это исключает необходимость подготовки питательной среды, мытья и автоклавирования лабораторной посуды. В пакетах с 225 мл стерильной забуференной пептонной воды проводят и гомогенизацию, и инкубирование анализируемого образца (при 37±1 °С в течение 18-24 ч) [22]. При исходном (1-5 КОЕ/25 г) содержании сальмонелл в анализируемом образце после этапа предобогащения титр бактерий достигает 102-104 КОЕ/мл [26].
Обогащение в селективных жидких средах. Использование нескольких питательных сред, различающихся по селективности, позволяет унифицировать метод выделения сальмонелл из любых образцов пищевых продуктов, независимо от содержания в них сопутствующих микроорганизмов. Культуральной жидкостью, полученной в результате предварительного обогащения в неселективной жидкой среде, инокулируют среду Раппопорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон). Параллельно производят селективное обогащение одной из двух сред (по выбору): тетратионатным бульоном Мюллера-Кауфманна (МКТбульон) или селенитовой обогатительной средой (ГОСТ Р 53665-2009). Посевы инкубируют при 37±1 °С в течение 24±3 ч. Эти среды, угнетая развитие других энтеробактерий, избирательны для сальмонелл и способствуют их размножению (до 104-106 КОЕ/мл).
Пересев на чашки и предварительная идентификация. Полученные культуры (см. предыдущий пункт) пересевают на 2 агаризованные дифференциально-диагностические среды, различающиеся по селективности. При этом используют ксилозолизин-дезоксихолатный агар (XLD-агар), хромогенный Рамбах-агар (эти среды избирательны для сальмонелл и шигелл, но угнетают рост других энтеробактерий) или одну из агаризованных дифференциально-диагностических сред, например, висмут-сульфитный агар или ксилозо-лизиновый агар с Тергитолом-4 (XLT4-агар).
Рис. 1. Выявление бактерий рода Salmonella стандартным методом (ГОСТ Р 52814-2007)
Выявление сальмонелл на хромогенном Рамбах-агаре. Принцип селективного определения заключается в ферментации сальмонеллами пропиленгликоля до кислоты. Под действием кислоты смесь рН-индикаторов среды окрашивает колонии сальмонелл в красный цвет. На Рамбах-агаре легко отличить Н2S-продуцирующие штаммы Citrobacter от сальмонелл: первые синего, вторые - красного цвета, тогда как на XLD-агаре или висмут-сульфитном агаре дифференцировать Н2S-продуцирующие бактерии с сальмонеллами затруднительно. Дезоксихолат натрия ингибирует рост сопутствующих грамположительных бактерий. Посев инкубируется в аэробных условиях при 37±1 °С в течение 24±3 ч. Колонии сопутствующих колиформных бактерий (Е. соli, Klebsiella pneumoniae) сине-зеленой окраски, колонии Shigella и Proteus - бесцветные либо слегка желтоватые. Таким образом, выросшие на Рамбах-агаре колонии сальмонелл легко отличить от всех других представителей семейства энтеробактерий.
Выявление сальмонелл на высокоселективном XLT4-агаре. Принцип определения сальмонелл основан на продуцировании бактериями сероводорода при их выращивании на высокоселективном XLT4-агаре. При этом колонии сальмонелл черной или красно-фиолетовой (с черным центром) окраски. Оптимальному росту сальмонелл способствуют пептон, дрожжевой экстракт и лизин; тергитол-4 эффективно подавляет рост протея (в отличие от дезоксихолата в XLD-агаре). Это практически полностью исключает возможность ложноположительных результатов при содержании в пробе Н2S-продуцирующих штаммов протея. Посев инкубируется в аэробных условиях при 35-37 °С в течение 18-24 ч. Выявление бактерий на XLT4-агаре хорошо дополняет исследования, выполненные на Рамбах-агаре. Селективное выявление сальмонелл - важное преимущество XLT4-агара при исследовании таких продуктов, как мясной фарш, содержащий большое количество сопутствующей микрофлоры [6].
Биохимическая и серологическая идентификация. Полученные на агаризованных средах колонии, предположительно относящиеся к сальмонеллам, выделяют для последующей биохимической идентификации. При этом удобно использовать наборы уже готовых стандартных тест-систем [4], например, систему Crystal [27]. Идентификатор микроорганизмов Crystal позволяет определять более 500 видов микроорганизмов, включая разные виды сальмонелл и других энтеробактерий. Основу системы составляют диагностические тест-панели с субстратами. Они позволяют по биохимическому профилю определить вид исследуемого организма. Преимуществами системы являются одноэтапное внесение исследуемого материала, отсутствие дополнительных реагентов, удобство, безопасность и точность исследования, а также экономичность метода. Окончательное подтверждение принадлежности выявленной культуры к сальмонеллам проводят согласно ГОСТ Р 53665-2009 [6]
Рис. 2. Ускоренный метод выявления бактерий рода Salmonella на среде MSRV [6]
Ускоренные методы выявления сальмонелл
Существенным недостатком классического метода выявления сальмонелл является длительность исследований. Альтернативные методы позволяют существенно сократить время обнаружения этих бактерий [5, 6, 10, 22].
Ускоренный метод выявления бактерий рода Salmonella с использованием среды Раппопорта-Вассилиадиса (среда MSRV), с новобиоцином (рис. 2). Полужидкая среда MSRV официально рекомендована для ускоренного выявления сальмонелл [6]. Принцип селективного определения этих бактерий на среде MSRV - выявление подвижности сальмонелл в полужидкой среде и образование ими светлой непрозрачной зоны роста - феномен роения. Рост сопутствующих бактерий ингибируется введением новобиоцина, наличием хлорида магния, малахитового зеленого и инкубацией при повышенной температуре - 41,5 °С (ГОСТ Р 53665-2009).
Отсутствие этапа селективного обогащения позволяет сократить общее время исследования на 24-48 ч. После предварительного обогащения исследуемый образец (0,1 см3) добавляют в центр чашки Петри со средой MSRV (или по 0,03 см3 в 3 местах на чашке Петри). Посев инкубируют крышкой вверх при 41,5±1 °С в течение 12-18 ч в аэробных условиях. При наличии сальмонелл в анализируемом образце вокруг места посева отмечается диффузный рост колоний подвижных штаммов сальмонеллы в толще этой среды (от центра к периферии), окруженных светлым ореолом - зоной подвижности колоний [6]. С края зоны подвижности колоний берут материал для пересева на дифференциально-диагностические среды [4]. При наличии на среде MSRV роста колоний в форме пуговки проводят их биохимическую идентификацию на возможную причастность к неподвижным сальмонеллам (S. pullorum, S. gallinarum).
Преимущества метода - сокращение времени исследования на 24-48 ч (за счет совмещения этапа селективного обогащения с этапом высева на агаризованную среду), высокая чувствительность, обеспечивающая выявление даже единичных клеток сальмонелл и экономичность метода.
Ускоренный метод выявления бактерий рода Salmonella с использованием среды Salmosyst® (рис. 3). Двухкомпонентная среда Salmosyst® официально рекомендована для применения в лабораториях Роспотребнадзора и производственных лабораториях [14]. Первый этап включает неселективное обогащение имеющихся в образце бактерий на среде Salmosyst® Broth Base (инкубирование при 35 °С в течение 6-8 ч). По окончании 1-го этапа к 10 см3 среды добавляют 1 таблетку Salmosyst Selective Supplement, что обеспечивает селективный рост сальмонелл. Посев инкубируют при 35 °С в течение 18-24 ч в аэробных условиях. Для идентификации сальмонелл культуру высевают на дифференциально-диагностические среды. Существенное сокращение продолжительности этапа неселективного обогащения обеспечивается исследованием большого объема аликвоты культуральной среды (10 см3, а не 0,1 см3), а также повышенной буферной емкостью среды Salmosyst за счет высокого содержания карбоната кальция (10 г/л), обеспечивающего оптимальную для роста сальмонелл нейтральность среды (рН 7).
Преимущества метода - сокращение времени исследования на 24-48 ч, высокая чувствительность (выявляются даже поврежденные клетки сальмонелл), простота выполнения анализа и экономичность.
ИФА-экспресс-тесты Singlepath® для выявления бактерий рода Salmonella (рис. 4). Иммунохроматографические экспресс-тесты Singlepath®-Salmonella одобрены ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора" и рекомендованы для выявления сальмонелл в пищевых продуктах и кормах [14]. Экспресстесты Singlepath®-Salmonella в течение ряда лет успешно применяются для сертификации пищевой продукции в микробиологических лабораториях Роспотребнадзора и независимых лабораториях. В исследованиях Санкт-Петербургской городской ветеринарной лаборатории [11] при выявлении сальмонелл в 120 образцах мяса птицы тесты Singlepath®-Salmonella и референтный метод [3] показали высокую сходимость результатов.
Принцип селективного определения сальмонелл с использованием экспресс-тестов Singlepath®Salmonella основан на реакции антигенов сальмонелл с высокоспецифичными антителами теста. После этапа селективного обогащения на среде Раппопорта-Вассилиадиса (RVS) аликвота обогащенной пробы (2 см3) термически инактивируется, после чего 0,16 см3 вносят в лунку тест-планшета. Содержащиеся в пробе антигены сальмонелл взаимодействуют с моноклональными антителами экспресс-теста, образуя окрашенный комплекс антиген-антитело, выявляемый визуально (см. рис. 4).
Рис. 3. Ускоренный метод выявления бактерий рода Salmonella с использованием среды Salmosyst® [14]
Рис. 4. Ускоренный метод выявление бактерий рода Salmonella с использованием ИФА экспресс-тестов Singlepath®-Salmonella [14]
Результат экспресс-теста считывают уже через 20 мин после внесения пробы. Если красная линия присутствует в тестовой (Т) и контрольной (С) зонах планшета, результат считают положительным; при ее присутствии только в С-зоне - отрицательным (рис. 5). При получении положительного ответа высевают культуральную жидкость на дифференциально-диагностические среды. Отрицательный ответ является окончательным и свидетельствует об отсутствии сальмонелл в анализируемом продукте. Таким образом, экспресс-тест Singlepath®Salmonella позволяет выявлять сальмонеллы в образце сразу после этапа селективного обогащения, не прибегая к дополнительным пересевам на дифференциально-диагностические среды.
Экспресс-тест Singlepath®-Salmonella можно использовать и как подтверждающий при идентификации характерных по морфологии колоний сальмонелл. Время исследования в этом случае также составляет 20 мин.
Преимуществами метода являются значительное сокращение времени исследований (на 48 ч), высокая специфичность и надежность определения. Метод не предусматривает сложных процедур пробоподготовки, использования каких-либо дополнительных приборов или устройств.
Экспресс-метод выявления бактерий рода Salmonella с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени (Real-Тime PCR). В сфере пищевой микробиологии в последние годы все шире применяют методы молекулярно-генетического анализа, в частности метод ПЦР [8, 23]. В процессе анализа in vitro амплифицируется ДНК сальмонелл. Мишенью для амплификации служат специфичные фрагменты нуклеиновых кислот патогена. Принципиальная особенность применения метода Real-Тime PCR - возможность детекции продуктов амплификации ДНК бактерии в динамике непосредственно в процессе проведения реакции. Анализ Real-Тime PCR осуществляется на амплификаторе, который выполняет циклы нагрева и охлаждения образца в заданном диапазоне температур и регистрирует флуюресценцию, соответствующую количеству образовавшихся ампликонов. Процедура ПЦР-анализа пищевой продукции по выявлению сальмонелл и других патогенных микроорганизмов регламентирует ГОСТ Р ИСО/МЭК-17025 [5].
Выявление сальмонелл в пищевых продуктах методом Real-Тime PCR позволяет определять наличие в них сальмонелл с высокой селективностью и чувствительностью (в анализируемом образце выявляются единичные клетки сальмонеллы!). Метод включает 3 обязательных этапа (рис. 5): 1) неселективное обогащение исследуемого образца, которое позволяет исключить ложноположительные результаты при детекции ДНК нежизнеспособных клеток) [23]; 2) пробоподготовку (экстракция ДНК из обогащенной культуры); 3) детекцию ДНК сальмонеллы в автоматическом режиме на термоциклере. Наряду с этим система позволяет также идентифицировать колонии сальмонелл с агаризованных сред в течение 2 ч. Компания Мерк (Германия) производит тесты для Real-Тime PCR - foodproof Salmonella. Эти тесты защищены международными сертификатами и лицензиями на право их использования в коммерческих целях для анализа сальмонелл [27].
Таким образом, метод Real-Тime PCR (рис. 6), позволяет обнаружить сальмонеллы в анализируемом объекте по наличию их ДНК, т.е. без выделения в чистой культуре. Метод обеспечивает автоматическую регистрацию результатов, характеризуется высокой производительностью, чувствительностью и селективностью. Однако для его реализации необходимы значительные затраты средств на приобретение амплификатора, дополнительное обустройство аналитической лаборатории, повышенные требования к ее чистоте [26].
Заключая настоящий обзор, следует еще раз отметить, что в последние годы в мире повсеместно наблюдается устойчивый рост сальмонеллезной пищевой токсикоинфекции. Основными факторами ее развития является загрязнение пищевых продуктов (мяса птицы, куриных яиц, мясных и молочных продуктов, полуфабрикатов, приправ), а также воды бактериями S. enterica subsp. Enteritidis. Классический метод исследования бактерий рода Salmonella с использованием питательных сред является основным референтным методом. Однако из-за длительности анализа использование одного классического метода оказывается недостаточным. Для ускорения выявления сальмонелл, значительного сокращения трудозатрат и экономии ресурсов в последние десятилетия за рубежом разработаны, испытаны и широко применяются альтернативные (ускоренные) методы и системы выявления сальмонелл. Эти методы и системы, получив статус официальных, стали широко использоваться и в России. В их числе иммунохроматографические экспресс-тесты (Singlepath®-Salmonella), модифицированные среды MSRV и Salmosyst, хромогенный Рамбах-агар, ПЦР-анализ в реальном времени (foodproof Salmonella) и др. Новые методы позволяют существенно (на 24-48 ч) сократить продолжительность исследований. Обладая высокой чувствительностью и избирательностью, они обеспечивают надежное выявление сальмонелл в пищевых продуктах, продовольственном сырье и кормах.
Рис. 5. Иммунохроматографические тесты (Singlepath®Salmonella) для экспресс-определения сальмонелл [14]: а - окончательный отрицательный результат; б - предварительный положительный результат
Рис. 6. Ускоренное выявление бактерий рода Salmonella методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (Real-time PCR)
Литература
1. Бондаренко В.М., Батуро А.П. Сальмонеллы - возбудители брюшного тифа и пищевой токсикоинфекции // Руководство по медицинской микробиологии. Кн. 2. - М.: БИНОМ, 2010. - С. 461-476.
2. Боровков М.Ф., Фролов В.П., Серко С.А. Ветеринарно-санитарная экспертиза с основами технологии и стандартизации продуктов животноводства. - СПб.; М.; Краснодар: Лань, 2010. - 260 с.
3. ГОСТ 7702.2.3-93. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Метод выявления сальмонелл. - 5 с.
4. ГОСТ Р 52814-2007 (ИСО 6579:2002). Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella. - М., 2008. - 23 с.
5. ГОСТ Р 52833-2007 (ИСО 22174:2005). Микробиология пищевой продукции и кормов для животных, метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Общие требования и определения. - М., 2008. - 12 с.
6 ГОСТ Р 53665-2009. Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл. - М.: Стандартинформ, 10 с.
7. Джавец Э., Мельник Дж.Л., Эйдельберг Э.А. Руководство по медицинской микробиологии: Пер. с англ. - М.: Медицина, 1982. - 118 с.
8. Ефимочкина Н.Р. Эмерджентные бактериальные патогены в пищевой микробиологии. - М.: Изд-во РАМН, 2008. - 256 с.
9. Кузнецова Н.А. Молекулярная эпидемиология сальмонеллеза, вызванного Salmonella enteritidis в Приморском крае: Автореф. дис. - канд. мед. наук. - Владивосток: ГУ НИИЭиМ СО РАМН, 2006. - 22 с.
10. Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды: Метод. указания (МУ 4.2.2723-10). - Роспотребнадзор РФ, 2011. - 111 с.
11. Мамлеева Д.А., Прошкина И.Л. // Ветеринар. практика. - 2007. - Т. 34, № 2. - С. 50-54.
12. Медицинская микробиология / Гл. ред. В.И. Покровский, О.К. Поздеев. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 1998. - 1183 с.
13. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология / Под ред. А.А. Воробьева. - М.: МИА, 2006. - 704 с.
14. Методы выявления патогенных микроорганизмов с использованием хроматографических экспресс-тестов производства Merck (Германия). Методические рекомендации. № 24ФЦ/976. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора РФ, 2004. - 23 с.
15. Микроорганизмы в воде - Salmonella. - 2011. (http. www/water/ru/bz/likbez/ salmonella)
16. Павелкина В.Ф., Пак С.Г., Еровиченков А.А. Инфекционные болезни: современные проблемы диагностики и лечения. - СПб.: Лань, 2008. - 177 с.
17. Панин А.Н., Куликовский А.В., Давлеев А.Д. и др. // Птица и птицепродукты. - 2010. - № 5. - С. 62-65.
18. Подборонов В.М., Подборонов А.М. Бактерии сальмонеллы и сальмонеллезы. - М.: БИНОМ, 2010. - 117 с.
19. Профилактика сальмонеллеза: Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.7.2616-10. - М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2010. - 18 с.
20. Пятницкмй Б.Н. Cальмонеллез: распространение, профилактика, лечение. (http. www. zivox .ru).
21. Сергевнин В.И. Современные тенденции в эпидемиологии сальмонеллезной инфекции и научно методические основы эпизоотолого-эпидемического надзора: Автореф. дис. - д-ра мед. наук. - Омск, 1995. - 41 с.
22. Cоколов Д.М. Duopath, Singlepath: Salmonella spp. - 2012. - 176 p. http. mibio. ru.
23. Яцюта М.А., Патрушев М.В., Воронкова Н.В., и др. // Ветеринария и кормление. - 2010. - № 3. - С. 26-27.
24. Bell C., Kyriakides A. Salmonella: a practical approach to the organism and its control in foods. - Blackwell Publishing, 2002. - 336 p.
25. ISO 6579: 2002/ FDAM 1:2007 (E) - Microbiology of food and animal feeding staffs. - Horizontal method for the detection of Salmonella spp. P. 2-8.
26. Jasson V., Jacxsens L., Lining P. et al. // Food Microbiology. - 2010. - Vol. 27. - P. 710-730.
27. Real-Тime PCR Salmonella; ID of microorganisms Crystal (http. www. mibio. ru). 2012. - 186 p.