Evaluation of the role of Campylobacter spp. in the occurrence of foodborne diseases and modern methods to detect the pathogen

• Natalya R. Efimochkina

Abstract

Infections caused by Campylobacter spp. are now considered to be one of the most important foodborne diseases worldwide, this organism is one of the most epidemiologically significant zoonotic pathogens. Among these pathogens Campylobacter jejuni have the greatest epidemiological importance, they are responsible for 90% of laboratory confirmed cases of food campylobacteriosis.

The frequency of detection of campylobacters in the environmental and on many raw foods, of both plant and animal origin, in normal intestine biota of domestic and wild animal and birds, indicates the prevalence of these bacteria and the high risk of contamination of food and water. The main factors of transmission in sporadic campylobacteriosis are the poultry and poultry products (up to 70% of the total number of cases), water (8%), raw milk (5%). One of the risk factors for the spread of emergent pathogen is its ability to persist in aquatic ecosystems. Continuing changes in landscape and agricultural intensification can cause further enhance microbial contamination of freshwater bodies and groundwater, and the associated increase in the number of cases of waterborne campylobacteriosis. Intensification of agriculture, expanding the range of applied disinfectants and antiseptics, uncontrolled use of antibiotics in livestock often leads to the selection of the sustainable strains of Campylobacter spp., which have antibiotic resistance and multiple virulence determinants.

This paper presents an overview of modern methods for the detection of Campylobacter spp., detailed culture and biochemical methods for the isolation of C. jejuni based on the use of selective culture media and diagnostic kits for the characterization of the phenotypic profiles of the strains. These methods are the starting point in selecting the most effective schemes of food control and surveillance. It is emphasized that the basis of microbiological analysis should be molecular methods based on real-time PCR, which allows to quantify present in foods of thermotolerant Campylobacter, including C. jejuni.

Keywords:Сampylobacter jejuni, food campylobacteriosis , pathogenicity factors, foods, detection methods

Cовременные системы обеспечения безопасности пищевых продуктов требуют детального знания и исследования особенностей новых патогенов, биохимических и генетических механизмов формирования их вирулентности, адаптации к неблагоприятным условиям внешней среды и трансформации бактериальных геномов. Установление эпидемической значимости тех или иных пищевых патогенов предполагает комплексный анализ фено- и генотипических признаков, определяющих таксономическую принадлежность и наличие факторов патогенности микроорганизмов, профиль резистентности к антимикробным препаратам, а также их идентификацию как факторов риска в пищевой цепочке.

Изменение свойств микроорганизмов в условиях антропогенной трансформации внешней среды сопровождается появлением новых или эволюционно измененных возбудителей заболеваний с пищевым путем передачи (эмерджентных пищевых патогенов), обладающих множественными факторами патогенности и устойчивостью к антимикробным средствам. Жизнедеятельность микроорганизмов в той или иной экологической нише непосредственно связана с генетически закрепленной способностью включать регуляторные системы изменчивости на разных стадиях развития микробной клетки. В свете современных концепций перестройка популяционных структур патогенов по факторам патогенности в условиях окружающей среды существенно отличается от характера персистенции возбудителя в клеточных системах макроорганизма при различных типах пищевых инфекций, что требует углубленного изучения биохимических и генетических аспектов этой проблемы.

Обширная группа условно-патогенных и патогенных бактерий включает значительное число микроорганизмов, из которых наиболее опасными в эпидемиологическом отношении являются отдельные представители родов Salmonella, Escherichia, Enterobacter, Listeria и Campylobacter и другие микроорганизмы, способные в определенных условиях вызывать заболевания с пищевым путем передачи.

Оценивая рейтинг вышеназванных микроорганизмов по частоте возникновения вспышек, числу пострадавших и тяжести заболевания, международные организации относят к числу наиболее важных эмерджентных патогенов следующие виды: бактерии рода Salmonella, энтерогеморрагические E. coli (ЕНЕС), Listeria monocytogenes, Campylobacter jejuni, Yersinia enterocolitica. Доминирующее влияние этих микроорганизмов в возникновении пищевых инфекций было установлено в результате анализа массовых вспышек заболеваний в разных странах мира с 1970-1980-х гг. [1].

В подавляющем большинстве они относились к зоонозам и возникали как вследствие потребления продуктов, полученных от больных животных, так и в результате вторичной контаминации при заготовке и переработке животноводческого сырья, в процессе приготовления и хранения пищи [2].

Гастроэнтероколиты, вызванные бактериями рода Campylobacter, являются наиболее распространенными острыми инфекционными зоонозными заболеваниями с пищевым путем передачи. Микроорганизмы Campylobacter spp. известны более 80 лет как возбудители заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц, в 1957 г. они впервые были выделены от больных людей с клиническими признаками гастроэнтерита. В результате установленной взаимосвязи между кишечными инфекциями, обусловленными термофильными кампилобактериями, в животноводческих хозяйствах и заболеваниями человека экспертный комитет ВОЗ в 1982 г. включил этот микроорганизм в официальный перечень возбудителей пищевых токсикоинфекций [3]. В настоящее время общепризнано, что заболевание людей кампилобактериозом вызывают бактерии Campylobacter jejuni (ранее известные как Campylobacter fetus ssp. jejuni).

В некоторых странах, таких как США и Великобритания, отмечается резкий рост случаев заболеваемости кампилобактериозом, число которых превалирует над другими распространенными пищевыми инфекциями - сальмонеллезом и шигеллезом. Широкое распространение кампилобактериозного энтерита в различных странах мира и большой социально-экономический ущерб от этого заболевания объясняют его включение ВОЗ в список эмерджентных пищевых инфекций [4].

Рассматривая таксономию возбудителей кампилобактериоза, следует отметить, что семейство Campylobacteriaceae включает 3 рода - Campylobacter, Arcobacter и Sulfurospirillum [5], каждый из которых включает несколько видов: Campylobacter spp. - 16 видов, Arcobacter spp. - 4 вида, Sulfurospirillum spp. - 5 видов.

Род Campylobacter, впервые описанный M. Veron и R. Chatelain в 1973 г., представлен грамотрицательными неспорообразующими палочками изогнутой или спиральной формы, с полярным расположением жгутиков на одном или двух концах, которое обусловливает специфическую штопорообразную подвижность бактериальной клетки. Эти бактерии являются каталазо- и оксидазоположительными микроаэрофилами; оптимальная атмосфера для роста: 3-15% кислорода, 2-10% углекислого газа и 85-87% азота. Шесть таксонов: Campylobacter jejuni subsp. jejuni, Campylobacter jejuni subsp. doylei, Campylobacter coli, Campylobacter lari, Campylobacter upsaliensis и Campylobacter helveticus образуют генетически родственную группу термофильных кампилобактеров с оптимальной температурой роста +42 °С, обладающих способностью инфицировать человека и теплокровных животных.

Большинство видов семейства Campylobacteriaceae характеризуется широкой распространенностью и разнообразием источников выделения (табл. 1), наибольшее значение в возникновении пищевых инфекций имеют C. jejuni и C. coli.

В развивающихся странах эпидемически значимым считают также вид C. upsaliensis.

Видовая идентификация Campylobacter spp. основана на определении фенотипических характеристик, включающих биохимические тесты, профили антибиотикорезистентности и температурные значения роста. Специфические свойства вида Campylobacter jejuni включают анаэробные/микроаэрофильные условия роста, температурный оптимум 42-43 °С, неспособность расти при температуре ниже 30 °С, что ассоциируется с отсутствием генов, ответственных за синтез белков холодового шока, играющих ведущую роль в адаптации многих бактерий к низким температурам [6].

Другие фенотипические характеристики C. Jejuni приведены в табл. 2.

Эпидемиология кампилобактериоза в настоящее время является объектом пристального внимания и детального изучения в большинстве развитых стран мира, поскольку бактерии рода Campylobacter все чаще регистрируются в качестве этиологического агента при пищевых вспышках, а также в спорадических случаях бактериальных гастроэнтеритов и диарейных заболеваний.

ВОЗ признает, что около 1% населения Западной Европы ежегодно инфицируется кампилобактерами [7], поэтому Campylobacter считается одним из наиболее значимых "новых" зоонозных патогенов, способных вызывать заболевания человека и животных.

Кампилобактериоз в большинстве случаев протекает с симптомами энтероколита и гастроэнтерита, продолжительность заболевания составляет от 2-3 дней до 2 нед и более, человек также может быть бессимптомным носителем в течение длительного времени.

Экстраинтестинальные кампилобактериозные инфекции преимущественно включают бактериемию, гемолитический уринарный синдром, перитониты, очаговые инфекции. У иммунокомпромиссных групп населения персистирующие диарейные заболевания и бактериемия с трудом поддаются лечению. Кампилобактериозы редко имеют летальный исход, однако уровень смертности при этой инфекции может недооцениваться, поскольку ассоциируется с другими этиологическими факторами.

Достаточно хорошо изучены такие осложнения кампилобактериоза, как синдром Гийена-Барре (GBS), синдром Миллера-Фишера (MFS) и реактивные артриты, которые являются иммунным ответом на гастроинтестинальную инфекцию [8].

GBS - это обратимый паралич, поражающий периферическую нервную систему. C. jejuni способен к ганглиозидоподобной мимикрии в липополисахаридном слое, вызывая иммунный ответ этих структур, что приводит к повреждению периферических нервных тканей, богатых ганглиозидами.

Основными серотипами при GBS являются HS:19 и HS:41. Реактивные артриты возникают после кампилобактериозной инфекции, по данным разных авторов, в 2,6-45% случаев, и ассоциируются с обнаружением C. jejuni [7].

Учитывая значительную распространенность и циркуляцию кампилобактеров в природе, исследователи уделяют большое внимание частоте обнаружения этих микроорганизмов в различных объектах. Они присутствуют в окружающей среде как комменсалы или патогены в организме домашней птицы или животных, и могут персистировать длительное время при неблагоприятных условиях.

В первую очередь C. jejuni рассматривается как нормальный обитатель кишечника птиц. Степень бактерионосительства у домашней птицы очень высока и достигает 90% [9]. В содержимом кишечника кур количество C. jejuni может достигать 106 КОЕ/г.

Однако частота обнаружения бактерий рода Campylobacter у других видов сельскохозяйственных животных и птицы, а также в полученном от них сырье свидетельствует о значительном распространении этих микроорганизмов и о возможной контаминации вырабатываемых пищевых продуктов. Данные о частоте выделения кампилобактеров обобщены Т. Humphrey и соавт. в 2007 г. [7] и приведены в табл. 3.

Представленный анализ сделан по результатам исследований, опубликованных в различных странах мира (более 20 стран). Показано, что при сравнительно высокой частоте обнаружения этих бактерий в разных видах мясного сырья наибольший риск для здоровья человека связан с употреблением куриного мяса, поскольку его удельный вес в структуре питания населения очень велик.

Основными источниками спорадических кампилобактерных токсикоинфекций являются домашняя птица (до 70% от общего числа случаев), контакты с домашними животными (6-30%), питьевая вода (8%), сырое молоко (5%).

Вспышки инфекций, связанных с заражением питьевой воды возбудителем Campylobacter jejuni, в последние годы стали довольно частым явленим в Скандинавских странах (Швеции, Норвегии и Финляндии), Новой Зеландии, США. Это связано с тем, что в районах с редким населением пресноводные экосистемы подвержены микробному загрязнению со стороны сельскохозяйственных предприятий. Выявлены сезонные колебания уровней зараженности Campylobacter водоемов: более высокие средние значения установлены летом, в сезон с максимальным использованием воды в рекреационных целях. Вспышки кампилобактериоза, связанные с водой и молочными продуктами, преимущественно регистрируются весной и осенью, в то время как спорадические заболевания наиболее часто наблюдаются в летний период.

Особенности возникновения этих заболеваний связаны в значительной мере с физиологическими свойствами возбудителя: C. jejuni являются термофильными микроорганизмами и не развиваются при температурах ниже 30 °С; они погибают при высушивании, в присутствии высоких концентраций кислорода и при низких значениях рН среды.

Обычные дезинфицирующие средства весьма эффективны против бактерий рода Campylobacter, солнечная радиация также губительно действует на эти микроорганизмы. Вместе с тем персистенция возбудителя в водных экосистемах является одним из основных факторов риска и обусловливает особенности экологии этого эмерджентного патогена.

Продолжающиеся изменения в структуре землепользования и интенсификация сельского хозяйства в ряде стран могут стать причиной даль- нейшего усиления микробного заражения пресных водоемов и грунтовых вод и связанного с этим увеличения количества случаев кишечных заболеваний с водным путем передачи, в том числе таких, как кампилобактериоз.

Заболеваемость кампилобактериозом в европейских странах в 1993-2000 гг. показана в табл. 4, которая включает данные 7-го и 8-го докладов Программы ВОЗ по надзору и контролю за пищевыми инфекциями и интоксикациями в Европе.

Во всех европейских странах на протяжении описанного периода отмечена четкая тенденция увеличения числа заболеваний, вызванных бактериями рода Campylobacter. Наибольший уровень заболеваемости зарегистрирован в Англии и Уэльсе.

Сведений о вспышках или спорадической заболеваемости, связанных с Campylobacter, в Российской Федерации на сегодняшний день недостаточно, поскольку эта нозологическая форма включается в общий перечень заболеваний без указания источников инфекции. При этом учитывается только заболеваемость детей в возрасте до 14 лет (см. рисунок), и диагноз устанавливается на основании клинической картины или косвенных иммунологических тестов. Лабораторное подтверждение роли пищевых продуктов как факторов передачи этих инфекций и квалификация последних как пищевых в настоящий момент практически не проводятся [10].

Следует отметить, что причины подъема заболеваемости кампилобактериозом остаются неизвестными. Имеются предположения о его взаимосвязи с повышением доли в питании населения продуктов из птицы, обычным обитателем кишечника которой являются бактерии рода Campylobacter, и распространением новых технологий упаковки пищевых продуктов в пленки и модифицированную газовую атмосферу, способствующих сохранности и проявлению биологических свойств возбудителя. Высказываются гипотезы о роли в инфицировании некультивируемых форм возбудителя при контактно-бытовом и пищевом пути передачи и перекрестном заражении готовых продуктов от сырой птицы.

Микроорганизмы Campylobacter jejuni обладают несколькими факторами вирулентности, которые определяются такими свойствами возбудителя, как хемотаксис и подвижность, адгезия и инвазия, гликозилирующие системы, продукция ци- толетального токсина CDT, капсулообразование, образование липоолигосахаридов (LOS) и др.

Способность колонизации интестинального тракта Campylobacter связана с хемотаксисом, который на уровне генома кодируется системами, близкими к таковым у E. coli, воздействуя на муцин, L-серин и L-фукозу слизистой кишечника.

Ряд других компонентов системы хемотаксиса C. jejuni идентифицированы как специфичные для данного возбудителя - CheY, CheV, CetA, CetB [11, 12]. Ведущим фактором, определяющим колонизацию кишечника, является образование полярных флагелл (жгутиков), обеспечивающих подвижность и способность к клеточной инвазии кампилобактеров. При этом флагеллы могут вызывать аутоагглютинацию бактериальных клеток, формируя микроколонии как in vitro, так и in vivo, адаптированные к существованию на эпителиальных поверхностях. Функционирование флагелл в качестве секреторных органелл является одним из факторов инвазии, определяющих патогенность C. jejuni [13, 14].

Одним из важных факторов вирулентности C. jejuni является способность к образованию цитолетального токсина СDT, который поражает эукариотические клетки в определенных стадиях деления [15]. Это связывающийся с мембраной клетки токсин, состоящий из трех субъединиц CdrA, CdrB и CdrC. Проникающая в клеточное ядро субъединица CdrB повреждает хромосомную ДНК.

Наличие СDT характерно для всех представителей C. jejuni, этот токсин может обнаруживаться также у Shigella dysenteriae, Helicobacter hepaticus и некоторых E. coli.

Выявление причин пищевого кампилобактериоза весьма важно для разработки профилактических мероприятий и снижения уровней заболеваемости. Ведущую роль в выявлении источников инфекции призваны сыграть современные методы эпидемиологических исследований и лабораторного анализа, позволяющие определить природу заболевания.

Методы выделения и детекции

Традиционные микробиологические методы позволяют определить наличие Campylobacter в пищевых продуктах, они основаны на применении селективных питательных сред и специальных условий культивирования бактерий. Процедура выделения Campylobacter из образцов пищевых продуктов включает:

- предобогащение в селективном бульоне (например, бульон Престона, среда Парка и Сандерса) при 37 °С в течение 4 ч в микроаэрофильных условиях (5% кислорода, 10% углекислого газа, 85% азота);

- обогащение в селективном бульоне Престона в микроаэрофильных условиях при 42 °С в течение 18 ч;

- пересев на 2 агаровые среды для выделения изолированных колоний (агар Кармали, агар Престона и др.), инкубирование в микроаэрофильных условиях при 42 °С в течение 24-72 ч.

Для повышения селективных свойств жидких и плотных питательных сред применяют антибиотики (полимиксин В, рифампицин, ванкомицин, триметоприм лактат, циклогексимид, нистатин и другие в различных комбинациях). Для обеспечения ростовых свойств, нейтрализации токсического действия кислорода и света в состав большинства сред вводят стерильную дефибринированную баранью или лошадиную кровь.

Поскольку использование крови в лабораториях, контролирующих пищевые продукты, вызывает затруднения, в настоящее время взамен этого компонента рекомендуют применять добавки на основе активированного угля, гематина, а также комбинации из сульфата железа, метабисульфита натрия и пирувата натрия. Для создания микроаэрофильных условий используют различные микроаэробно-генерирующие системы: газ-пакеты, СО2-инкубаторы. Перечень наиболее часто используемых селективных сред для выделения Campylobacter приведен в табл. 5.

Выросшие типичные или подозрительные колонии исследуют по основным морфологическим и биохимическим признакам, в том числе: окраска по Граму, подвижность, оксидазный и каталазный тесты, нитрат/нитрит редукция, гидролиз гиппурата, ферментация углеводов, чувствительность к антибиотикам, температура роста и др. (табл. 6).

Биохимическая дифференциация различных видов Campylobacter вызывает определенные затруднения в связи с общностью большинства признаков и возможным присутствием атипичных вариантов, например гиппуратнегативных или каталазоотрицательных штаммов C. jejuni [16].

Открытые в 1986 г. некультивируемые формы Campylobacter [17] являются фактором риска ввиду возможного присутствия их в пищевых продуктах и воде; тем самым возникают дополнительные затруднения в выявлении возбудителя и оценке безопасности зараженных объектов. Поскольку эти формы (VBNC) не способны расти на культуральных средах, они не могут быть обнаружены традиционными бактериологическими методами, в связи с чем возникает необходмость применения более точных методов, основанных на принципах молекулярной детекции.

Наиболее часто для детекции и типирования термотолерантных Campylobacter используют ме- тоды на основе полимеразной цепной реакции (ПЦР), направленные на выявление специфичных поверхностно экспрессируемых маркеров (липополисахаридов, антигенных детерминант, флагеллярных генов), консервативных последовательностей 16SРНК, а также генетических детерминант факторов вирулентности и токсинообразования C. jejuni (табл. 7).

Существует большое количество модификаций ПЦР-методов, предназначенных для детекции и идентификации C. jejuni, основная часть которых была разработана для исследования чистых культур кампилобактеров или клинических образцов (в том числе фекалий). Значительно меньше вариантов постановки ПЦР предназначено и используется для прямого об- наружения C. jejuni в пищевых продуктах, которые обычно содержат малые количества возбудителя и характеризуются высоким уровнем сопутствующей микрофлоры [18]. Перечень опубликованных молекулярных методов детекции термотолерантных видов Campylobacter приведен в табл. 8.

При исследовании пищевых продуктов наиболее часто применяются методы, основанные на ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ) или изотермальной амплификации нуклеиновых кислот NASBA, которые обладают наибольшей чувствительностью и позволяют выявлять ДНК преимущественно жизнеспособных Campylobacter spp. Проведение ПЦР-РВ требует тщательного подбора способов пробоподготовки, включая селективное обогащение образцов в питательных бульонах, иммуномагнитную сепарацию и др.

В зависимости от выбранного целевого гена или нуклеотидной последовательности можно проводить межвидовую дифференциацию термотолерантных представителей рода Campylobacter с достаточной степенью достоверности. Наиболее специфичным для идентификации C. jejuni считают последовательность ceuE, амплификация которой позволяет обнаружить видоспецифические фрагменты ДНК у близкородственных микроорганизмов C. jejuni и С. coli.

Ниже приведено краткое описание постановки мультиплексной ПЦР и дуплексной ПЦР-РВ. Олигонуклеотидные праймеры и размеры ампликонов представлены в табл. 9.

При проведении мультиплексной ПЦР [48] используют 3 пары праймеров для детекции последовательности 16s rRNA (Campylobacter spp.), генов mapA (C. Jejuni ) и ceuE (С. coli). В состав ПЦР-смеси (30 мкл) входят 1хПЦР буфер, 1,5 мM MgCl2, 0,2 мM dNTPS, 0,6 е.а./мкл Taq-полимеразы, 0,5мкM MD16S1 и MD16S1 праймеров, 0,42мкM праймеров MDmapA1, MDmapA2, COL3 и MDCOL2, 100 нг пробы исследуемой ДНК. Амплификацию проводят в следующем режиме: 1 цикл при 95 °С -10 мин, 35 циклов: при 95 °С - 30 с, при 59 °С -90 с, при 72 °С - 1 мин и один цикл при 72 °С -10 мин. Продукты амплификации (10 мкл) анализируют методом электрофореза в 2% TBE-агарозном геле.

Дуплексная ПЦР-РВ направлена на одновременную детекцию двух генов mapA (C. jejuni) и ceuE (С.coli) с использованием TaqMan-зондов для получения флюоресцентного сигнала [49].

Смесь для ПЦР (20 мкл) включает TaqMan универсальную смесь, по 0,3 мкM каждого праймера, 0,1 мкM mapA-зондов, 0,05мкM ceuE-зондов и 100 нг исследуемой пробы ДНК. Амплификацию проводят в термоциклере ABI PRISM при следующих параметрах: 95 °С - 10 мин, 40 двухэтапных циклов 95 °С - 15 с, 60 °С - 60 с. Как и в традиционной ПЦР, включают позитивные и негативные контроли для каждой пары используемых праймеров.

Оценку результатов ПЦР проводят по нарастанию флюоресцентного сигнала в определенном диапазоне циклов амплификации.

В Российской Федерации разработана, стандартизована и внедрена в практику лабораторий методика детекции Campylobacter jejuni с использованием ПЦР-РВ, подробное описание которой приведено в Методических указаниях МУ 4.2.2872-2011 "Методы выявления и идентификации патогенных бактерий - возбудителей инфекционных заболеваний с пищевым путем передачи в продуктах питания на основе ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией".

Основные этапы метода включают:

1. Посев пищевых продуктов для накопления бактерий рода Campylobacter в среде селективного обогащения. Для этого к необходимому количеству подготовленной пробы добавляют 9-кратный объем селективного бульона Престона или селективного бульона Дойла. Полученную взвесь инкубируют в течение 4 ч при 37 °С и в течение 18-24 ч при (42±1) °С. Инкубация осуществляется в микроаэрофильных условиях.

2. Экстракция ДНК. Применяются коммерчески доступные комплекты реагентов на основе методов преципитации или сорбции ДНК на силикагеле.

3. ПЦР для выявления ДНК Campylobacter spp. осуществляется с использованием наборов реагентов, обеспечивающих гибридизационно-флуоресцентную детекцию продуктов амплификации по конечной точке (вариант FEP) и в режиме реального времени (вариант FRT). Для подтверждения жизнеспособности бактериальных клеток Campylobacter методом ПЦР-FRT одновременно тестируют инокуляты пищевых продуктов, подвергавшиеся и не подвергавшиеся инкубации в селективной среде обогащения.

4. Заключение о присутствии Campylobacter spp. в исследованной массе продукта выдают при получении положительного результата ПЦР (выявлении ДНК) и подтверждения их жизнеспособности. Отставание сигнала по каналу JOE/HEX на 3 и более пороговых цикла (Ct) для образца, не подвергавшегося инкубации (Ctне инк.-Ctинк.≥3), свидетельствует о наличии в продукте жизнеспособных клеток Campylobacter.

В целом, учитывая большую значимость проблемы, представляется необходимым проведение углубленного изучения природных источников распространения Campylobacter jejuni, факторов вирулентности, патогенеза и механизмов возникновения инфекций, обусловленных этими эмерджентными патогенами. Наиболее перспективные исследования в изучении возбудителей пищевого кампилобактериоза будут основаны на применении инновационных геномных технологий, включающих методы ДНК-типирования патогенов на основе "microarray"-технологий, мультиплексных форматов ПЦР и секвенирования геномов Campylobacter spp. Это позволит сформировать расширенную базу данных о генетических регуляторных механизмах экспрессии вирулентных свойств этих микроорганизмов для разработки новых критериев безопасности и анализа степени микробиологического риска возникновения пищевого кампилобактериоза.

Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда (проект № 15-16-00015).

Литература

1. Ефимочкина Н.Р. Некоторые закономерности появления эмерджентных пищевых патогенов // Вопр. питания. 2006. № 4. С. 9-15.

2. Шевелева С.А., Шурышева Ж.Н. Изучение загрязненности пищевых продуктов бактериями рода Campylobacter // Вопр. питания. 2006. № 6. С. 38-43.

3. John T., Prescott M., Munroe L. Campylobacter jejuni enteritis in man and domestic animals // J. Am. Vet. Med. Assoc. 1982. Vol. 181, N 12. P. 1524-1530.

4. Schmidt K. WHO Surveillance Programme for control of foodborne infections and intoxications in Europe. 6th Report - FAO/WHO Collaborating Centre for Research and Training in Food Hygiene and Zoonosis. Berlin, 1995.

5. Nachamkin I., Guerry P. Campylobacter infections // Foodborne Pathogens: Microbiology and Molecular Biology. Wymondham, 2005. P. 285-293.

6. Levin R.E. Rapid Detection and Characterization of Foodborne Pathogens by Molecular techniques. USA : CRC Press, 2010. 592 p.

7. Humphrey T., O’Brien S., Madsen M. Campylobacters as zoonotic pathogens: a food production perspective // Int. J. Food Microbiol. 2007. Vol. 117, N 03. P. 237-257.

8. Nachamkin I. Chronic effects of Campylobacter infections // Microbes Infect. 2002. Vol. 4, N 4. P. 399-403.

9. Куликовский А.В. Эмерджентные пищевые зоонозы. М., 2004. 174 с.

10. Шевелева С.А., Ефимочкина Н.Р. Иванов А.А. и др. Пищевые отравления и инфекции в Российской Федерации за период 1992-2001 гг.: состояние проблемы и тенденции // Гиг. и сан. 2003. № 3. С. 38-45.

11. Marchant J., Wren B., Ketley J. Exploiting genome sequence: predictions for mechanisms of Campylobacter chemotaxis // Trends Microbiol. 2002. Vol. 10, N 4. P. 155-159.

12. Young K.T., Davis L.M., Dirita V.J. Campylobacterjejuni: molecular biology and pathogenesis // Nat. Rev. Microbiol. 2007. Vol. 5, N 9. P. 665-679.

13. Kopecko D.J., Hu L., Zaal K.J. Campylobacterjejuni - microtubuledependent invasion // Trends Microbiol. 2001. Vol. 9, N 8. P. 389-396.

14. Pei Z., Burucoa C., Grignon B. et al. Mutation in the peb1A locus of Campylobacterjejuni reduces interactions with epithelial cells and intestinal colonization of mice // Infect. Immun. 1998. Vol. 66, N 3. P. 938-943.

15. Lara-Tajero M., Galan J.E. Cytolethal distending toxin: limited damage as a strategy to modulate cellular functions // TrendsMicrobiol. 2002. Vol. 10. P. 147.

16. Paulsen P., Kanzler P., Hilbert F. et al. Comparison of three methods for detecting Campylobacter spp. in chilled or frozen meat // Int. J. Food Microbiol. 2005. Vol. 103, Issue 2. P. 229-233.

17. Rollins D.M., Colwell R.R. Viable but nonculturable stage of Campylobacter jejuni and its role in survival in the natural aquatic environment // Appl. Environ. Microbiol. 1986. Vol. 52, N 3. P. 531-538.

18. Булахов А.В., Ефимочкина Н.Р., Шевелева С.А. Обнаружение бактерий рода Campylobacter в птицепродуктах с помощью метода полимеразной цепной реакции // Вопр. питания. 2010. Т. 79, № 3. С. 24-29.

19. Cheng Z., Griffiths M.W. Rapid Detection of Campylobacter jejuni in Chicken Rinse Water by Melting-Peak Analysis of Amplicons in RealTime Polymerase Chain Reaction // J. Food Protection. 2003. Vol. 66, N 8. P. 1343-1352.

20. Sails A.D., Fox A.J., Bolton F.J. et al. A Real-Time PCR Assay for the Detection of Campylobacter jejuni in Foods after Enrichment Culture // Appl. Environ. Microbiol. 2003. Vol. 69, N 3. P. 1383-1390.

21. Josefsen M.H., Cook N., D’Agostino M. et al. Validation of a PCRbased method for detection of food-borne thermotolerant Campylobacters in a multicenter collaborative trial // Appl. Environ. Microbiol. 2004. Vol. 70, N 7. P. 4379-4383.

22. Oliveira T.C.R.M., Barbut S., Griffiths M.W. Detection of Campylobacter jejuni in naturally contaminated chicken skin by melting peak analysis of amplicons in real-time PCR // Int. J. Food Microbiol. 2005. Vol. 104, Issue 1. P. 105-111.

23. Abu-Halaweh M., Bates J., Patel B.K.C. Rapid detection and differentiation of pathogenic Campylobacter jejuni and Campylobacter coli by real-time PCR // Res. Microbiol. 2005. Vol. 156, N 1. P. 107-114.

24. Oliveira T.C.R.M., Barbut S., Griffiths M.W. A Robotic DNA purification protocol and real-time PCR for the detection of Campylobacter jejuni in foods // J. Food Protection. 2005. Vol. 68, N 10. P. 2131-2135.

25. Wolffs P., Norling B., Hoorfar J. et al. Quantification of Campylobacter spp. in Chicken Rinse Samples by Using Flotation prior to Real-Time PCR // Appl. Environ. Microbiol. 2005. Vol. 71, N 10. P. 5759-5764.

26. Krause M., Josefsen M. H., Lund M. et al. Comparative, collaborative, and on-site validation of a TaqMan PCR method as a tool for certified production of fresh, Campylobacter-free chickens // Appl. Environ. Microbiol. 2006. Vol. 72, N 8. P. 5463-5468.

27. Debretsion A., Habtemariam N., Wilson S. et al. Real-time PCR assay for rapid detection and quantification of Campylobacter jejuni on chicken rinses from poultry processing plant // Mol. Cell. Probes. 2007. Vol. 21, Issue 3. P. 177-181.

28. Fukushima H., Katsube K., HataY. et al. Rapid separation and concentration of food-borne pathogens in food samples prior to quantification by viable-cell counting and real-time PCR // Appl. Environ. Microbiol. 2007. Vol. 73, N 1. P. 92-100.

29. Wolffs P.F.G., Glencross K., Norling B., Griffiths M.W. Simultaneous quantification of pathogenic Campylobacter and Salmonella in chicken rinse fluid by a flotation and real-time multiplex PCR procedure // Int. J. Food Microbiol. 2007. Vol. 117, Issue 1. P. 50-54.

30. Hong J., Jung W.K., Kim J.M. et al. Quantification and differentiation of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in raw chicken meats using a real-time PCR Method // J. Food Protection. 2007. Vol. 70, N 9. P. 2015-2022.

31. Konkel M.E., Gray S.A., Kim B.J. et al. Identification of the enteropathogens Campylobacter jejuni and Campylobacter coli based on the cadF virulence gene and its product // J. Clin. Microbiol. 1999. Vol. 37, N 3. P. 510-517.

32. Waage A.S., Vardund T., Lund V., Kapperud G. Detection of Small Numbers of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli cells in environmental water, sewage, and food samples by a seminested PCR assay // Appl. Environ. Microbiol. 1999. Vol. 65, N 4. P. 1636-1643.

33. Waller D.F., Ogata S.A., Quantitative immunocapture PCR assay for detection of Campylobacter jejuni in foods // Appl. Environ. Microbiol. 2000. Vol. 66, N 9. P. 4115-4118.

34. Thunberg R. L., Tran T.T., Walderhaug M.O. Detection of thermophilic Campylobacter spp. in blood-free enriched samples of inoculated foods by the polymerase chain reaction // J. Food Protection. 2000. Vol. 63, N 3. P. 299-303.

35. Denis M., Refregier-Petton J., Laisney M.J. et al. Campylobacter contamination in French chicken production from farm to consumers. Use of a PCR assay for detection and identification of Campylobacter jejuni and Camp. coli // J. Appl. Microbiol. 2001. Vol. 91, N 2. P. 255-267.

36. Moreno Y., Hernandez M., Ferrus M. A. et al. Direct detection of thermotolerant campylobacters in chicken products by PCR and in situ hybridization // Res. Microbiol. 2001. Vol. 152, N 6. P. 577-582.

37. Bolton F.J., Sails A.D., Fox A.J. et al. Detection of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in foods by enrichment culture and polymerase chain reaction enzyme-linked immunosorbent assay // J. Food Protection. 2002. Vol. 65, N 5. P. 760-767.

38. Hong Y., Berrang M.E., Liu T. et al. Rapid detection of Campylobacter coli, C. jejuni, and Salmonella enterica on poultry carcasses by using PCR-enzyme-linked immunosorbent assay // Appl. Environ. Microbiol. 2003. Vol. 69, N 6. P. 3492-3499.

39. Josefsen M.H., Jacobsen N.R., Hoorfar J. Enrichment followed by quantitative PCR both for rapid detection and as a tool for quantitative risk assessment of food-borne thermotolerant Campylobacters // Appl. Environ. Microbiol. 2004. Vol. 70, N 3. P. 3588-3592.

40. Bohaychuk V.M., Gensler G.E., King R.K. et al. Evaluation of detection methods for screening meat and poultry products for the presence of foodborne pathogens // J. Food Protection. 2005. Vol. 68, N 12. P. 2637-2647.

41. Mateo E., Carcamo J., Urquijo M. et al. Evaluation of a PCR assay for the detection and identification of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in retail poultry products // Res. Microbiol. 2005. Vol. 156, N 4. P. 568-574.

42. Quinones B., Parker C.T., Janda J.M. Jr. et al., Detection and genotyping of Arcobacter and Campylobacter isolates from retail chicken samples by use of DNA oligonucleotide arrays // Appl. Environ. Microbiol. 2007. Vol. 73, N 11. P. 3645-3655.

43. Schmid M.W., Lehner A., Stephan R. et al. Development and application of oligonucleotide probes for in situ detection of thermotolerant Campylobacter in chicken faecal and liver samples // Int. J. Food Microbiol. 2005. Vol. 105, Issue 2. P. 245-255.

44. Uyttendaele M., Schukkink R., van Gemen B., Debevere J. Detection of Campylobacter jejuni added to foods by using a combined selective enrichment and nucleic acid sequence-based amplification (NASBA) // Appl. Environ. Microbiol. 1995. Vol. 61, N 4. P. 1341-1347.

45. Uyttendaele M., Bastiaansen A., Debevere J. Evaluation of the NASBA® nucleic acid amplification system for assessment of the viability of Campylobacter jejuni // Int. J. Food Microbiol. 1997. Vol. 37, Issue 1. P. 13-20.

46. Uyttendaele M., Debevere J., Lindqvist R. Evaluation of buoyant density centrifugation as a sample preparation method for NASBAELGA detection of Campylobacter jejuni in foods // Food Microbiol. 1999. Vol. 16, N 6. P. 575-582.

47. Churruca E., Girbau C., Martinez I. et al. Detection of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in chicken meat samples by realtime nucleic acid sequence-based amplification with molecular beacons // Int. J. Food Microbiol. 2007. Vol. 117, Is. 1. P. 85-90.

48. Denis M., Soumet C., Rivoal K. et al. Development of a m-PCR assay for simultaneous identification of Campylobacter jejuni and C. coli. // Lett. Appl. Microbiol. 1999. Vol. 29, Is. 6. P. 406-410.

49. Best E.L., Powell E.J., Swift C. et al. Applicability of a rapid duplex real-time PCR assay for speciation of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli directly from culture plates // FEMS Microbiol. Lett. 2003. Vol. 229, N 2. P. 237-241.

All articles in our journal are distributed under the CC BY-NC-ND 4.0 (Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International)

© GEOTAR-Media Publishing Group. The use of textual and illustrative content from this publication for the training of any artificial intelligence systems - including machine learning models and neural networks - is strictly prohibited without the prior written consent of the copyright holder.