Analysis of the influence of enzyme preparations produced using technological microorganisms on the microbiome and cellular immunity of rats
AbstractThe observed increase in the production of enzyme preparations (EP) using mutant and genetically modified microorganisms makes it necessary to assess their risks to consumer health. However, at present, their possible influence on the microbiome, immune status of the macroorganism has not been sufficiently studied.
The purpose of the research was to assess the effect of two EP – the complex of hydrolases with proteolytic and nuclease activity from the Aspergillus oryzae RCAM 01134 mutant strain (EP1) and the neutral protease – bacillolysin and serine protease from the Bacillus subtilis-96 (VKM B-3499D) mutant strain (FP2) on the intestine microbiome and cellular immunity indices of the experimental animals.
Material and methods. The experiment on the subacute toxicity of EP1 and EP2 was carried out for 30 days using Wistar rats (7 groups of 10 males each). EP was administered to animals intragastrically in doses 0 (control – saline solution); 1, 10 and 100 mg/kg body weight per day. The composition of the cecum microbiocenosis was studied by inoculating tenfold dilutions of the cecum contents on the differential diagnostic media. The quantitative content of short-chain fatty acids (SCFA – acetic, propionic, isobutyric, butyric, isovaleric, valerianic acids) in the colon contents was determined by high-performance gas chromatography. The expression of T- and B-lymphocyte and NK-cell receptors (CD45RА+, CD3+, CD161+, CD3+CD4+, CD3+CD8+) in rat peripheral blood was determined using an FC-500 flow cytometer.
Results. The data obtained as a result of the microbiocenosis studies of the cecum contents indicate that EP1 and EP2 administration had a reliable effect on the quantitative and qualitative composition of aerobic microorganisms, including opportunistic microorganisms, as well as it lead to a weak increase in the number of bifidobacteria and lactobacilli. The development of an inflammatory process in animals of all experimental groups have been caused by the changes in the qualitative and quantitative composition of various groups of microorganisms in the cecum contents, SCFA level in the faeces and indicators of cellular immunity under intragastric administration of FP1 and FP2 for 30 days.
Conclusion. The revealed difference in the composition of the cecum microbiocenosis, SCFAs produced by the intestinal microflora, and the cellular immunity indices of the experimental animals under EP1 and EP2 administration, in our opinion, is due to the spectrum of metabolites produced by the intestinal microflora, as well as strains of Aspergillus oryzae RCAM 01134 and Bacillus subtilis-96 (VKM B-3499D). The features of the relationship between the spectrum of SCFAs produced by the intestinal microflora, their quantity and the percentage of T- and B-lymphocytes in the blood of rats indicate different mechanisms of the influence of EP1 and EP2 on the microbiome and immune status of the macroorganism.
Keywords: risk assessment; enzyme preparations; short-chain fatty acids; microbiocenosis; cellular immunity, rats
Funding. The research was carried out using a subsidy from the Russian Ministry of Education and Science for the implementation of a state assignment (No. FGMF-2022-0003).
Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.
Contribution. Study design – Bagryantseva O.V., Gureu Z.G.; collection and processing of material – Bagryantseva O.V., Gmoshinski I.V. , Gureu Z.G., Sheveleva S.A., Markova Yu.M., Shumakova A.A., Trushina E.N., Zotov V.A., Sokolov I.E., Kolobanov A.I., Khotimchenko S.A., Elizarova E.V.; statistical processing of results – Gmoshinski I.V. , Bagryantseva O.V., Gureu Z.G.; writing the article – Bagryantseva O.V., Khotimchenko S.A., Gureu Z.G.; editing the article, responsibility for the integrity of all parts of the article – all authors.
Acknowledgments. The authors express their deep gratitude to the Deputy Director for Research of the Russian Scientific Research Institute of Food Biotechnology – the branch of the Federal Research Centre for Nutrition, Biotechnology and Food Safety, Doctor of Biological Sciences, Professor of the Russian Academy of Sciences E.M. Serba and the Head of the Laboratory of Biotechnology of New Producers of Hydrolytic Enzymes, Ph.D. N.V. Tsurikova for the presented samples of enzyme preparations.
For citation: Bagryantseva O.V., Gureu Z.G., Gmoshinski I.V., Sheveleva S.A., Markova Yu.M., Zotov V.A., Trushina E.N., Shumakova A.A., Sokolov I.E., Kolobanov A.I., Elizarova E.V., Khotimchenko S.A. Analysis of the influence of enzyme preparations produced using technological microorganisms on the microbiome and cellular immunity of rats. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2024; 93 (5): 73–84. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2024-93-5-73-84 (in Russian)
References
1. Mohajeri M.H., Brummer R.J.M., Rastall R.A., Weersma R.K., Harmsen H.J.M., et al. The role of the microbiome for human health: from basic science to clinical applications. Eur J Nutr. 2018; 57 (suppl 1): S1–14. DOI: https://doi.org/10.1007/s00394-018-1703-4
2. Sheveleva S.A., Kuvaeva I.B., Efimochkina N.R., Markova Yu.M., Prosyannikov M.Yu. Intestinal microbiome: from the standard of norm to pathology. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2020; 89 (4): 35–51. DOI: https://doi.org/10.24411/0042-8833-2020-10040 (in Russian)
3. Hou K., Wu Z.X., Chen X.Y., Wang J.Q., Zhang D., et al. Microbiota in health and diseases. Signal Transduct Target Ther. 2022; 7 (1): 135; DOI: https://doi.org/10.1038/s41392-022-00974-4
4. Kotlyarov S. Role of short-chain fatty acids produced by gut microbiota in innate lung immunity and pathogenesis of the heterogeneous course of chronic obstructive pulmonary disease. Int J Mol Sci. 2022; 23 (9): 4768. DOI: https://doi.org/10.3390/ijms23094768
5. Scheithauer T.P.M, Rampanelli E., Nieuwdorp M., Vallance B.A., Verchere C.B., van Raalte D.H., et al. Gut microbiota as a trigger for metabolic inflammation in obesity and type 2 diabetes. Front Immunol. 2020; 11: 571731. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.571731
6. Mills S., Lane J.A., Smith G.J., Grimaldi K.A., Ross R.P., Stanton C. Precision nutrition and the microbiome. Part II: potential opportunities and pathways to commercialization. Nutrients. 2019; 11 (7): 1468. DOI: https://doi.org/10.3390/nu11071468
7. Markova Yu.M., Sidorova Yu.S. Cereal products from amaranth, quinoa and buckwheat: role in human nutrition and maintaining the intestinal microbiome. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2022; 91 (6): 17–29. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2022-91-6-17-29 (in Russian)
8. Ciani M., Lippolis A., Fava F., Rodolfi L., Niccolai A., Tredici M.R. Microbes: food for the future. Foods. 2021; 10: 971. DOI: https://doi.org/10.3390/foods10050971
9. Bagryantseva O.V. Justification of the need to develop measures to manage risks associated with the use of food products produced using microbial synthesis Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2020; 89 (2): 64–76. DOI: https://doi.org/10.24411/0042-8833-2020-10017 (in Russian)
10. Serba E.M., Rimareva L.V., Overchenko M.B., Sokolova E.N., Pogorzhel’skaya N.S., et al. Filamentous fungi are a promising source of hydrolases and valuable biopolymers. Vestnik Rossiyskoy sel’skokhozyaystvennoy nauki [Bulletin of the Russian Agricultural Science]. 2016; (4): 41–3. (in Russian)
11. Serba E.M., Mochalina P.Yu., Rimareva L.V., Overchenko M.B., Shelekhova N.V., et al. Study of the ionic composition of the biomass of Aspergillus oryzae – a producer of hydrolytic enzymes. Mikologiya i fitopatalogiya [Mycology and Phytopathology]. 2019; (2): 95–100. DOI: https://doi.org/10.1134/S0026364819020090 (in Russian)
12. Kostyleva E.V., Sereda A.S., Velikoretskaya I.A., Tsurikova N.V., Mineeva D.T., Bobrovenko E.Yu. Obtaining a new strain of Bacillus subtilis-96 - a producer of proteolytic enzymes for the food industry. Pishchevaya promyshlennost’ [Food Processing Industry]. 2021; (9): 35–6. DOI: https://doi.org/10.52653/PPI.2021.9.9.012 (in Russian)
13. Kostyleva E.V., Sereda A.S., Velikoretskaya I.A., Mineeva D.T., Tsurikova N.V. Efficiency of an enzyme preparation based on a new mutant strain of Bacillus subtilis-96 in the hydrolysis of whey proteins and egg whites. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2022; 91 [2 (540)]: 72–80. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2022-91-2-72-80 (in Russian)
14. Park E.J., Khaliullin T.O., Shurin M.R., Kisin E.R., Yanamala N., Fadeel B., et al. Fibrous nanocellulose, crystalline nanocellulose, carbon nanotubes, and crocidolite asbestos elicit disparate immune responses upon pharyngeal aspiration in mice. J Immunotoxicol. 2018; 15 (1): 12–23. DOI: https://doi.org/10.1080/1547691X.2017.1414339
15. Yanamala N., Farcas M.T., Hatfield M.K., Kisin E.R., Kagan V.E., Geraci C.L., et al. In vivo evaluation of the pulmonary toxicity of cellulose nanocrystals: a renewable and sustainable nanomaterial of the future. ACS Sustain Chem Eng. 2014; 2 (7): 1691–8. DOI: https://doi.org/10.1021/sc500153k
16. Zhang Ch., Tang P., Xu H., Weng Ya., Tang Q., Zhao H. Analysis of short-chain fatty acids in fecal samples by headspace-gas chromatography. Chromatographia. 2018; 81 (9): 1317–23. DOI: https://doi.org/10.1007/s10337-018-3572-7
Изучение содержания короткоцепочечных жирных кислот в содержимом толстой кишки
Количественное содержание всех определяемых КЦЖК в содержимом толстой кишки при введении ФП1 и ФП2 статистически значимо отличалось от такового у животных контрольной группы. Во всех опытных группах в исследуемых образцах преобладала уксусная кислота (см. таблицу). Количество уксусной, пропионовой и масляной кислот при введении ФП1 увеличивалось по сравнению с контролем (р<0,05). Особенно выраженным это повышение было при введении ФП1 в дозах 1 и 10 мг на 1 кг массы тела в сутки, однако введение в дозе 100 мг на 1 кг массы тела в сутки сопровождалось резким снижением концентрации этих КЦЖК в фекалиях. Содержание изомасляной, изовалериановой и валериановой кислот в опытных группах (2-4-я группы) в ~2 раза превышало их количество в контроле, но не зависело значимым образом от дозы. Во всех группах животных, получавших ФП2 (5-7-я группы), наблюдалось достоверное (в ≥2 раза) повышение содержания определяемых КЦЖК. Данное изменение также не имело дозозависимого характера. Наибольшие количества жирных кислот в содержимом толстой кишки отмечены в группе, получавшей ФП2 в максимальной дозе - 100 мг на 1 кг массы тела в сутки (см. таблицу).
)
Расчет корреляции между содержанием отдельных групп микроорганизмов в содержимом слепой кишки и количеством КЦЖК в содержимом толстой кишки выявил различия реакции организма при введении животным ФП1 и ФП2 (рис. 4).
)
Установлена зависимость между определяемым количеством микроорганизмов в содержимом слепой кишки и уровнем продуцируемых ими КЦЖК. В случае с ФП1 положительная сильная корреляция отмечена между ОМЧ анаэробов и количеством изомасляной, изовалериановой и валериановой кислот (r от 0,752 до 0,938, р<0,05), а также между содержанием лактобактерий и уровнем уксусной, пропионовой, изомасляной, изовалериановой и валериановой кислотами (r от 0,625 до 0,989, р<0,05) (см. рис. 4, ФП1). Увеличение концентрации гемолитических аэробных микроорганизмов и энтерококков в содержимом слепой кишки вызывало снижение продукции кишечной микробиотой КЦЖК. Высокая степень корреляции выявлена между содержанием плесневых и дрожжеподобных грибов и количеством уксусной, пропионовой и масляной кислот (r от 0,739 до 0,958), а также валериановой (r=0,475-0,611) кислоты (р<0,05). Количество энтеробактерий и стафилококков коррелировало с содержанием масляной кислоты (r=0,540, р<0,05) (см. рис. 4, ФП1).
Что касается ФП2, то как и в случае с ФП1, высокие коэффициенты корреляции были отмечены между общим количеством анаэробных микроорганизмов и содержанием КЦЖК. Также отмечалась высокая и средняя степень зависимости между содержанием в фекалиях КЦЖК и количеством лактобактерий. Введение ФП2 оказывало наиболее значимое влияние на общее количество аэробных микроорганизмов в содержимом кишечника (r от 0,878 до 0,996) и плесневых грибов (r от 0,776 до 0,973) (р<0,05) и, следовательно, на продукцию КЦЖК. Корреляция между количеством высеваемых гемолитических штаммов аэробных микроорганизмов и количеством КЦЖК была менее выраженной, но достаточно значимой. Она была обратной и составила в отношении пропионовой кислоты r=-0,696, для изомасляной кислоты r=-0,672, для изовалериановой кислоты r=-0,692 (р<0,05) (см. рис. 4, ФП2).
На фоне введения ФП1 наблюдалась прямая зависимость между количеством всех определяемых КЦЖК в содержимом толстой кишки и процентом NK-клеток в периферической крови (от r=0,802 в случае с изовалериановой кислотой до r=0,948 в случае с пропионовой кислотой, р<0,05). Обратная высокая зависимость (r>0,5, р<0,05) отмечалась в отношении определяемых количеств уксусной, пропионовой, масляной, валериановой кислот и процентом содержания Т-Лф (CD3+) в периферической крови, а также между количеством изомасляной, изовалериановой, валериановой кислоты и содержанием В-Лф (CD45RA+) (рис. 5, ФП1). ИРИ (CD4/CD8) у крыс, получавших ФП1, не зависел значимым образом от синтеза КЦЖК(r от -0,082 до 0,441).
)
При введении ФП2 наблюдалась отрицательная зависимость между содержанием В-Лф (CD45RA+) и всеми КЦЖК (r от -0,943 до -0,699), а также между процентом содержания в крови T-цитотоксических Лф (CD3+CD8+) и всеми видами определяемых жирных кислот (r от -0,778 до -0,415) (р<0,05) (см. рис. 5, ФП2). ИРИ (CD4/CD8) имел высокую степень корреляции с количеством различных КЦЖК (r от 0,592 до 0,889, р<0,05).
Обсуждение
Анализ возможного использования изучаемых ФП в пищевой промышленности в подостром эксперименте показал, что оба фермента оказывали выраженное действие на количественный и качественный состав микробиоценоза слепой кишки и иммунный статус крыс. Их введение в желудочно-кишечный тракт оказывало слабовыраженное пробиотическое действие на подопытных животных, что определялось достоверным увеличением количества бифидобактерий и недостоверным ростом высеваемых из содержимого слепой кишки лактобактерий.
ФП1, производимый с использованием мутантного штамма Aspergillus oryzae RCAM 01134, значительно подавлял рост условно-патогенных микроорганизмов и вызывал увеличение содержания в содержимом слепой кишки гемолизирующих эритроциты колоний. Это свидетельствует о повышении патогенного потенциала аэробных микроорганизмов в составе микробиоценоза крыс и об активации воспалительных процессов при воздействии ФП1, а также наличии в составе фермента антибиотических веществ.
При введении ФП2 в дозе 100 мг на 1 кг массы тела в сутки наблюдались недостоверный рост общего количества аэробных микроорганизмов, дрожжеподобных и плесневых грибов, снижение в содержимом слепой кишки количества энтеробактерий, стафилококков (по сравнению с контролем). ФП2 в дозе 1 мг на 1 кг массы тела в сутки вызывал выраженный рост процентного содержания гемолитических микроорганизмов с дальнейшим значимым снижением этого показателя при его внутрижелудочном введении в дозах 10 и 100 мг на 1 кг массы тела в сутки. Полученные данные свидетельствуют, по-видимому, о наличии в составе данного ФП2 антибиотических веществ. Однако это требует подтверждения. Вследствие развития воспалительных процессов в желудочно-кишечном тракте крыс данные изменения вызвали активацию клеточного иммунитета. При этом ФП1 вызывал менее выраженное, чем ФП2, влияние на содержание в слепой кишке общего количества анаэробных микроорганизмов, бифидо- и лактобактерий. Кроме того, его введение стало причиной снижения количества бактероидов в составе микробиома.
ФП1 и ФП2 различным образом действовали на количество выделяемых из содержимого толстой кишки КЦЖК. Выявлена значимая прямая зависимость между высеваемыми количествами дрожжеподобных и плесневых грибов и содержанием в содержимом кишки уксусной, пропионовой и масляной кислот (r>0,5, p<0,05). Определяемые количества этих КЦЖК находились в обратной зависимости с количеством гемолитических штаммов аэробных микроорганизмов, а изовалериановой кислоты - с количеством энтерококков.
Выявленные корреляции между содержанием различных групп микроорганизмов в слепой кишке и КЦЖК подтверждают полученные ранее данные о диагностической значимости определения количеств уксусной, пропионовой и масляной кислот в фекалиях при анализе микробиоценоза кишечника [4, 7]. Изменение продуцируемых микрофлорой кишечника количеств изомасляной, изовалериановой и валериановой кислот при введении ферментных препаратов и корреляция этих значений с количеством различных групп микроорганизмов свидетельствует об участии этих КЦЖК в индукции воспалительного процесса у подопытных животных.
Введение ФП1 и ФП2 крысам вызывало рост процентного содержания в периферической крови NK-клеток с фенотипом (CD161+) (p<0,05). Расчетные значения показателя ИРИ с большой степенью вероятности свидетельствуют о том, что внутрижелудочное введение ФП1 и ФП2 вызывало воспаление у подопытных животных.
Наибольшая прямая зависимость отмечалась между содержанием в крови NK-клеток с фенотипом (CD161+) и всеми определяемыми КЦЖК. Высокая степень обратной корреляции выявлена между количеством содержащихся в крови Т-хелперов (CD3+CD4+) и КЦЖК [за исключением соотношения (CD3+CD4+)/масляная кислота при введении ФП1], а также процентом Т-цитотоксических Лф (CD3+CD8+) и уровнем КЦЖК при введении ФП2. Значимые корреляции между содержанием в крови крыс Т-хелперов (CD3+CD4+), процентным содержанием в крови цитотоксических Лф (CD3+CD8+) и уровнем КЦЖК при введении ФП1 не выявлены (r от -0,275 до 0,141). На фоне введения ФП2, напротив, отмечена высокая степень (р<0,05) прямой зависимости для CD3+CD4+ (r от 0,489 в случае с уксусной кислотой до 0,819 в случае с пропионовой кислотой) и обратной зависимости для CD3+CD8+ (от -0,415 до -0,779).
Различия в степени корреляции между спектром продуцируемых микрофлорой кишечника КЦЖК, количеством КЦЖК и процентным содержанием в периферической крови Т- и В-Лф свидетельствуют о разных механизмах влияния ФП1 и ФП2 на изученные показатели иммунитета.
Заключение
В подостром эксперименте на крысах линии Wistar показано выраженное негативное влияние комплекса гидролаз протеолитического и нуклеазного действия из мутантного штамма Aspergillus oryzae RCAM 01134 (ФП1) и нейтральной протеазы - бациллолизина и сериновой протеазы из мутантного штамма Bacillus subtilis-96 (ВКМ В-3499D) (ФП2) на количественный и качественный состав аэробов и условно-патогенных микроорганизмов в содержимом слепой кишки. Выявленная разница в количественном и качественном составе микрофлоры кишечника, продуцируемых микрофлорой КЦЖК при введении различных доз ФП1 и ФП2, обусловила различия показателей клеточного иммунитета у подопытных животных. Полученные данные свидетельствуют об индукции в организме воспалительных процессов при введении как ФП1, так и ФП2.
Особенности влияния ФП1 и ФП2 на количественное содержание КЦЖК в содержимом толстой кишки и показатели клеточного иммунитета подопытных животных, на наш взгляд, обусловлены различным спектром продуцируемых микрофлорой кишечника и штаммами Aspergillus oryzae RCAM 01134 и Bacillus subtilis-96 (ВКМ В-3499D) метаболитов. Этот факт необходимо принимать во внимание при оценке рисков пищевой продукции, получаемой при помощи микробного синтеза.
Литература
1. Mohajeri M.H., Brummer R.J.M., Rastall R.A., Weersma R.K., Harmsen H.J.M. et al. The role of the microbiome for human health: from basic science to clinical applications // Eur. J. Nutr. 2018. Vol. 57, suppl. 1. S1-S14. DOI: https://doi.org/10.1007/s00394-018-1703-4
2. Шевелева С.А., Куваева И.Б., Ефимочкина Н.Р., Маркова Ю.М., Просянников М.Ю. Микробиом кишечника: от эталона нормы к патологии // Вопросы питания. 2020. Т. 89, № 4. С. 35-51. DOI: https://doi.org/10.24411/0042-8833-2020-10040
3. Hou K., Wu Z.X., Chen X.Y., Wang J.Q., Zhang D. et al. Microbiota in health and diseases // Signal Transduct. Target. Ther. 2022. Vol. 7, N 1. P. 135; DOI: https://doi.org/10.1038/s41392-022-00974-4
4. Kotlyarov S. Role of short-chain fatty acids produced by gut microbiota in innate lung immunity and pathogenesis of the heterogeneous course of chronic obstructive pulmonary disease // Int. J. Mol. Sci. 2022. Vol. 23, N 9. P. 4768. DOI: https://doi.org/10.3390/ijms23094768
5. Scheithauer T.P.M, Rampanelli E., Nieuwdorp M., Vallance B.A., Verchere C.B., van Raalte D.H. et al. Gut microbiota as a trigger for metabolic inflammation in obesity and type 2 diabetes // Front. Immunol. 2020. Vol. 11. Article ID 571731. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2020.571731
6. Mills S., Lane J.A., Smith G.J., Grimaldi K.A., Ross R.P., Stanton C. Precision nutrition and the microbiome. Part II: potential opportunities and pathways to commercialisation // Nutrients. 2019. Vol. 11, N 7. P. 1468. DOI: https://doi.org/10.3390/nu11071468
7. Маркова Ю.М., Сидорова Ю.С. Зерновые продукты из амаранта, киноа и гречихи: роль в питании человека и поддержании кишечного микробиома // Вопросы питания. 2022. Т. 91, № 6. С. 17-29. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2022-91-6-17-29
8. Ciani M., Lippolis A., Fava F., Rodolfi L., Niccolai A., Tredici M.R. Microbes: food for the future // Foods. 2021. Vol. 10. P. 971. DOI: https://doi.org/10.3390/foods10050971
9. Багрянцева О.В. Обоснование необходимости разработки мероприятий по управлению рисками, связанными с использованием пищевой продукции, производимой при помощи микробного синтеза // Вопросы питания. 2020. Т. 89, № 2. С. 64-76. DOI: https://doi.org/10.24411/0042-8833-2020-10017
10. Серба Е.М., Римарева Л.В., Оверченко М.Б., Соколова Е.Н., Погоржельская Н.С. и др. Мицелиальные грибы - перспективный источник гидролаз и ценных биополимеров // Вестник Российской сельскохозяйственной науки. 2016. № 4. С. 41-43.
11. Серба Е.М., Мочалина П.Ю., Римарева Л.В., Оверченко М.Б., Шелехова Н.В. и др. Исследование ионного состава биомассы Аspergillus oryzae - продуцента гидролитических ферментов // Микология и фитопатология. 2019. № 2. С. 95-100. DOI: https://doi.org/10.1134/S0026364819020090
12. Костылева Е.В., Середа А.С., Великорецкая И.А., Цурикова Н.В., Минеева Д.Т., Бобровенко Е.Ю. Получение нового штамма Bacillus subtilis-96 - продуцента протеолитических ферментов для пищевой промышленности // Пищевая промышленность. 2021. № 9. С. 35-36. DOI: https://doi.org/10.52653/PPI.2021.9.9.012
13. Костылева Е.В., Середа А.С., Великорецкая И.А., Минеева Д.Т., Цурикова Н.В. Эффективность ферментного препарата на основе нового мутантного штамма Bacillus subtilis-96 при гидролизе белков молочной сыворотки и яичного белка // Вопросы питания. 2022. Т. 91, № 2 (540). С. 72-80. DOI: https://doi.org/10.33029/0042-8833-2022-91-2-72-80
14. Park E.J., Khaliullin T.O., Shurin M.R., Kisin E.R., Yanamala N., Fadeel B. et al. Fibrous nanocellulose, crystalline nanocellulose, carbon nanotubes, and crocidolite asbestos elicit disparate immune responses upon pharyngeal aspiration in mice // J. Immunotoxicol. 2018. Vol. 15, N 1. P. 12-23. DOI: https://doi.org/10.1080/1547691X.2017.1414339
15. Yanamala N., Farcas M.T., Hatfield M.K., Kisin E.R., Kagan V.E., Geraci C.L. et al. In vivo evaluation of the pulmonary toxicity of cellulose nanocrystals: a renewable and sustainable nanomaterial of the future // ACS Sustain. Chem. Eng. 2014. Vol. 2, N 7. P. 1691-1698. DOI: https://doi.org/10.1021/sc500153k
16. Zhang Ch., Tang P., Xu H., Weng Ya., Tang Q., Zhao H. Analysis of short-chain fatty acids in fecal samples by headspace-gas chromatography // Chromatographia. 2018. Vol. 81, N 9. P. 1317-1323. DOI: https://doi.org/10.1007/s10337-018-3572-7
All articles in our journal are distributed under the CC BY-NC-ND 4.0 (Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International)
© GEOTAR-Media Publishing Group. The use of textual and illustrative content from this publication for the training of any artificial intelligence systems - including machine learning models and neural networks - is strictly prohibited without the prior written consent of the copyright holder.