Выявление мельдония в моче добровольцев методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией после употребления молока коров, прошедших профилактический курс применения ветеринарного препарата Эмидонол®

Постников Павел Викторович; Полосин Андрей Вячеславович; Мочалова Елена Сергеевна; Орджоникидзе Зураб Гивиевич; Никитюк Дмитрий Борисович; Тутельян Виктор Александрович

Резюме

Эмидонол^® - отечественный антиоксидантный препарат, широко применяемый в ветеринарии как с профилактической целью, так и при патологических состояниях, связанных с кислородной недостаточностью. Продуктом его биотрансформации в организме животных является мельдоний, относящийся к модуляторам метаболизма и входящий в Запрещенный список Всемирного антидопингового агентства (ВАДА) с 2016 г. В представленной работе добровольцы однократно принимали образцы молока коров, прошедших 15-дневный курс ветеринарным препаратом Эмидонол^® 10%, полученные от одной из ферм Подмосковья.

Цель исследования - изучение возможности качественного определения мельдония в образцах мочи после однократного употребления больших количеств молока коров, прошедших 15-дневный курс ветеринарным препаратом Эмидонол^® 10%, и длительности выведения запрещенного в спорте модулятора метаболизма из организма с учетом критериев идентификации ВАДА методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС).

Материал и методы. Образцы молока отбирали на 15-й (последний) день инъекционного курса коровам лекарственным ветеринарным препаратом Эмидонол^® 10%. Для исследований использовали образцы мочи добровольцев до и после однократного приема утром 3 стаканов (900 мл) свежего коровьего молока, собранные в течение 48 ч. Добровольцы (n=4, возраст - 35-52 года, масса тела 65-93 кг, пол не учитывался) не принимали ранее препаратов мельдония, каких-либо биологически активных добавок к пище, а также молока, молочных и мясных продуктов за 4-5 дней до сдачи бланкового образца и во время исследований. Пробоподготовку образцов мочи проводили с применением метода "dilute and shoot". Для анализа использовали метод ВЭЖХ-МС/МС. Идентификацию мельдония осуществляли в режиме мониторинга селективных реакций (SRM) по следующим переходам и энергиям соударения: 147.1>147.1 (15), 147.1>132.1 (17), 147.1>59.1 (17), 147.1>58.1 (17), 147.1>42.1 (60).

Результаты. Установлено, что мельдоний достоверно определяется в образцах мочи добровольцев спустя 12 ч при идентификации с использованием 5 вышеуказанных SRM-переходов и в течение 36-40 ч с использованием переходов 147.1>59.1 (17), 147.1>58.1 (17) после однократного употребления 900 мл молока. Пик концентраций приходится на 5-10 ч после приема (оценочная концентрация в моче ~160-400 нг/мл) с последующим снижением до 2,5-5 нг/мл и ниже спустя 36-40 ч. Представлены профили выведения запрещенного модулятора в мочу.

Заключение. Показана принципиальная возможность качественной идентификации мельдония в образцах мочи добровольцев в течение 36-40 ч при разовом употреблении больших количеств молока коров, прошедших курс ветеринарным препаратом Эмидонол^® 10%.

Ключевые слова: Эмидонол®; мельдоний; допинг-контроль; употребление молока; высокоэффективная жидкостная хроматография в сочетании с тандемной масс-спектрометрией

Эмидонол (3-(2,2,2-триметилгидразиний) пропионат-2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина дисукцинат) - отечественный ветеринарный препарат, оказывающий антиоксидантное, мембранопротекторное и антигипоксическое действие [1]. Он представляет собой сложную химическую структуру, состоящую из дисукцината метилэтилгидроксипиридина (эмоксипина) и мельдония (рис. 1). Его применение у мелкого и крупного рогатого скота, домашних животных и птицы разрешено Россельхознадзором как в профилактических целях, так и при патологических состояниях, сопровождающихся гипоксией, в виде 5, 10 и 20% раствора [2]. Препарат доступен без рецепта в ветеринарных аптеках и зоомагазинах.

Для применения у крупного рогатого скота рекомендованная концентрация препарата составляет 10%. Попадая в организм животного, Эмидонол^® подвергается биотрансформации с образованием молекул мельдония и мексидола (эмоксипина). Эффект последнего, как считает ряд авторов [3], может приводить к увеличению производительности у спортсменов и сопоставим с действием допинговых препаратов. Таким образом, молочные и мясные продукты оказываются контаминированными веществом, внесенным в Запрещенный список Всемирного антидопингового агентства (ВАДА) в соответствии со ст. S4 п. 4 "Модуляторы метаболизма" [4].

На сегодняшний момент опубликовано несколько статей, посвященных тематике определения данного запрещенного вещества в пищевых продуктах с целью допинг-контроля методами сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией высокого разрешения (СВЭЖХ-МСВР) [5] или тандемной масс-спектрометрией высокого разрешения (ВЭЖХ-МС/МСВР) [6, 7], однако исследуемыми образцами в них были либо мясо и молоко [5], либо моча добровольцев после приема пастеризованного молока с добавлением мельдония [6]. В нашем исследовании добровольцы однократно принимали образцы (900 мл, или 3 стакана) молока коров, прошедших 15-дневный курс ветеринарным препаратом Эмидонол^® 10%, полученные с одной из ферм Подмосковья, после чего проводили качественное определение мельдония в моче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС).

Согласно информации Российского антидопингового агентства "РУСАДА" с 2003 по 2021 г. до 30,3% от общего количества положительных проб спортсменов содержали мельдоний и он являлся самым употребляемым допинговым веществом¹ [8, 9]. В связи с этим проблема контаминации пищевых продуктов мельдонием и его определения чрезвычайно важна как для отечественных спортсменов, так и для антидопингового сообщества в целом.

Цель исследования - изучение возможности качественного определения мельдония в образцах мочи после однократного употребления больших количеств молока коров, прошедших 15-дневный курс ветеринарным препаратом Эмидонол^® 10%, и длительности выведения запрещенного в спорте модулятора метаболизма из организма с учетом критериев идентификации ВАДА методом ВЭЖХ-МС/МС.

¹ РУСАДА: количество положительных проб на мельдоний в 2024 году сократилось. [Интернет­ресурс] URL: https://rsport.ria.ru/20240522/rusada­1947725070.html (дата обращения: 17.07.2024).

Материал и методы

Образцы для анализа и реагенты

Для проведения профилактического инъекционного курса коровам использовали лекарственный ветеринарный препарат Эмидонол^® 10% (ООО "НВЦ Агроветзащита", РФ), приобретенный в аптечной сети. Препарат реализуется через аптечные сети и разрешен к применению в качестве средства безрецептурного отпуска. Дозировки вводили согласно инструкции к препарату в зависимости от массы тела животных в течение 15 дней ежедневно утром. Образцы молока отбирали на 15-й (последний) день курса в пластиковые стерильные бутылки объемом 1 л.

Для исследований использовали образцы мочи добровольцев до и после однократного приема утром 3 стаканов (900 мл) свежего коровьего молока, собранные в течение 48 ч. Добровольцы (n=4, возраст - 35-52 года, масса тела 65-93 кг, пол не учитывался) не принимали ранее препаратов мельдония, каких-либо биологически активных добавок к пище, а также молока, молочных и мясных продуктов за 4-5 дней до сдачи бланкового образца и во время исследований. Образцы мочи отбирали в стерильные медицинские контейнеры объемом 100 мл, маркировали их, указывая дату и время сдачи, хранили при температуре +4 °С или замораживали при -20 °С до проведения пробоподготовки.

Работа не противоречит Хельсинкской декларации², получены письменные разрешения добровольцев на использование их биологического материала для проведения исследований.

² Всемирная медицинская ассоциация. Хельсинкская декларация. [Интернет­ресурс] URL: https://asmu.ru/upload/iblock/067/Хельсинкская%20декларация.pdf (дата обращения: 17.07.2024).

В качестве внутреннего стандарта использовали дейтерированный мельдоний (Meldonium-D3, сертифицированный стандарт) (TLC PharmaChem Inc., Канада), из которого готовили раствор с концентрацией 1 мг/мл. Для приготовления положительных контрольных образцов мочи и растворов с концентрацией мельдония 10, 100, 1000 нг/мл использовали референсный стандарт мельдония дигидрата (European Pharmacopoeia, Meldonium Dihydrate CRS batch 1) (EDQM, Франция); из него также готовили сток-раствор с концентрацией 1 мг/мл, который добавляли в отрицательный контрольный образец мочи.

Для проведения исследований использовали метанол для хроматографии (чистота не менее 99,8%), ацетонитрил, уксусную кислоту (HPLC grade) (JT Baker™, Нидерланды), воду (HPLC grade) (Thermo Scientific Chemical, США), ацетат аммония (чистота не менее 99,9%) (Sigma-Aldrich, США), аргон сжатый 5.0 с чистотой не менее 99,999%. Для приготовления буферных растворов применяли деионизированную воду, удельное сопротивление 18,2 МОм×см (Millipore, США).

Вспомогательное оборудование и материалы

Кримпер, декаппер, стеклянные виалы объемом 1,5 мл (Macherey-Nagel GmbH & Co, Duren, Германия), автоматические дозаторы переменного объема 0,5-10, 20-200, 100-1000, 500-5000 мкл (Eppendorf, Германия) и наконечники к ним, настольная центрифуга с бакетным ротором для пробирок объемом 1,5-2 мл Centrifuge 5430 (Eppendorf, Германия), пробирки полипропиленовые 1,5 мл (Eppendorf, Германия), пробирки типа фалькон 15 и 50 мл (Greiner Bio-One, Австрия), аналитические весы OHaus Discovery DV215CD (точность 5 знаков), аппарат для встряхивания жидкости Vortex.

Пробоподготовка

Для исследований отбирали по 100 мкл образцов мочи добровольцев до (бланк) и после приема молока, а также по 100 мкл отрицательного и положительных контрольных образцов мочи в пробирки типа эппендорф объемом 1,5 мл. Добавляли 900 мкл дилюента (для приготовления дилюента в мерную колбу объемом 100 мл вносили 22 мкл раствора внутреннего стандарта с концентрацией 0,1 мг/мл (Meldonium-D3) и доводили до метки метанолом). После встряхивали и центрифугировали в течение 10 мин при 14 000 g. Затем отбирали по 900 мкл надосадочной жидкости в стеклянные виалы и закрывали крышками. Пробоподготовку образцов молока коров для оценки концентраций мельдония проводили таким же образом.

Для приготовления подвижной фазы А из бутыли с водой объемом 2,5 л удаляли 15 мл и добавляли 2,5 мл концентрированной уксусной кислоты и 12,5 мл 2М раствора ацетата аммония. Подвижной фазой В являлся ацетонитрил.

Параметры инструментального анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии/тандемной масс-спектрометрии

Анализ методом ВЭЖХ-МС/МС проводили с использованием жидкостного хроматографа Ultimate 3000, соединенного с тройным квадрупольным масс-спектрометром модели TSQ Vantage (ThermoFisher Scientific, США) с источником ионизации электроспреем с нагреваемым потоком распыляющего газа в режиме регистрации положительных ионов (ESI+). Для анализа использовали колонку для ВЭЖХ Cortecs UPLC HILIC 2.1×100 с размером частиц 1,6 мкм и предколонку для ВЭЖХ Cortecs UPLC HILIC 2.1×5 с размером частиц 1,7 мкм (Waters, США). Скорость потока 0,3 мл/мин. Объем вводимой пробы - 10 мкл. Термостатирование колонки 40 °С. Программа градиентного элюирования представлена в таблице.

Регистрация положительных ионов в режиме мониторинга селективных реакций (SRM): время МС-анализа (MS run time) - 9 мин, давление газа (collision gas pressure) - 1,5 мТорр, ширина пика (FWHM, Q1) - 1,0, ширина пика (FWHM, Q3) - 1,0, DCV - 5V, температура капилляра - 300 °С, температура испарителя - 370 °С, время одного полного цикла - 0,3 с, напряжение на капилляре (ESI+) - 4000 В, давление основного распылительного газа (Sheath gas pressure) - 50,0, поток вспомогательного распылительного газа (aux gas flow) - 20,0, давление шторного газа (ion sweep gas pressure) - 0,0.

Результаты и обсуждение

Перед изучением выведения мельдония с мочой вслед за употреблением разовой дозы молока коров, собранного после курсового инъекционного применения препарата Эмидонол^® 10%, оценивали концентрации запрещенного модулятора метаболизма в образцах молока. В данном исследовании не принималось во внимание множество факторов, которые могут оказывать влияние на содержание продуктов биотрансформации препарата Эмидонол^® в молоке (особенности метаболизма каждой особи, рацион питания, объем потребляемой жидкости и т.д.). Важно отметить, что использованное для исследования молоко не подвергалось пастеризации или воздействию высоких температур. Были получены следующие оценочные концентрации мельдония: образец 1 - 3700 нг/мл, образец 2 - 3200 нг/мл, образец 3 - 1400 нг/мл, образец 4 - 1350 нг/мл. Первые 2 образца молока - утренняя дойка, образцы 3 и 4 - вечерняя дойка.

На рис. 2 приведены графики выведения мельдония с собранной в течение 48 ч после однократного утреннего приема 900 мл молока мочой добровольцев, которые не употребляли в пищу иных молочных продуктов или мяса. По оси абсцисс приводится время выведения, по оси ординат - оценочная концентрация мельдония (в нг/мл). Концентрацию мельдония оценивали по 2 самым долгоживущим и стабильным SRM-переходам (147.1>59.1, 147.1>58.1), предел обнаружения составил около 2,5 нг/мл. Как и в случае с образцами молока, концентрация мельдония в образцах мочи может варьировать в зависимости от индивидуальных особенностей метаболизма, скорости клубочковой фильтрации почек добровольцев, количества употребляемой жидкости и т.д. Из представленных данных видно, что максимальные концентрации мельдония в организме достигаются через 5-10 ч после употребления молока. Так, у добровольца 1 она составила около 400 нг/мл, добровольца 2 - 310 нг/мл, добровольца 3 - 160 нг/мл, добровольца 4 - 260 нг/мл. Затем наблюдалось резкое снижение концентрации, и последующие 24 ч она уменьшалась примерно с 20 нг/мл (спустя 12-13 ч после приема) до 2,5-5 нг/мл и ниже (спустя 36-40 ч). У добровольца 2 оценочные концентрации мельдония оставались на уровне ~5 нг/мл чуть более 42 ч.

Мельдоний, будучи метаболическим средством и антигипоксантом, влияет на восстановительные процессы организма, активируя гликолиз, протекающий без дополнительного потребления кислорода, стабилизирует митохондриальный потенциал. Отмечается, что при приеме такой однократной дозы молока добровольцы не почувствовали никакого эффекта, повышения работоспособности или бодрости. Это неудивительно, так как терапевтические дозы мельдония составляют около 500-1000 мг/сут, а количество, полученное при употреблении даже большого объема контаминированного молока, значительно (на порядки) ниже.

Согласно техническому документу ВАДА TD2023IDCR³ для подтверждения идентичности аналита в образце должны выполняться некоторые хроматографические и масс-спектрометрические критерии. Так, время хроматографического удерживания мельдония (в данном случае 5,00 мин) в образце не должно отличаться более чем на 1%, или ±0,1 мин от такового в референсном образце. Для МС/МС-определения необходимо получить как минимум 2 диагностических иона (т.е. 2 SRM-перехода - ион-прекурсор и ион-продукт). Отношение сигнал : шум (S : N) для всех диагностических пиков должно быть более 3:1. Относительная интенсивность пиков каждого диагностического иона не должна отличаться от таковых в референсном образце более чем на величину (выражаемую в процентах или в абсолютных значениях), указанную в TD2023IDCR³.

³ Технический документ ВАДА TD2023IDCR. [Интернет­ресурс] URL: https://www.wada­ama.org/sites/default/files/2023­02/td2023idcrv1.1_eng_final.pdf (дата обращения: 05.08.2024).

Под воздействием энергии столкновения ион - предшественник мельдония с m/z 147.1 (C₆H₁₅N₂О₂+) диссоциирует с образованием 4 ионов-продуктов с m/z 42.1 (C₂H₄N+), m/z 58.1 (C₃H₈N+), m/z 59.1 (C₃H₉N+) в результате потери остатка триметиламина и m/z 132.1 (C₅H₁₂N₂O₂+) (рис. 3).

C. Görgens и соавт. [7] установили, что при фрагментации в результате потери одной метильной группы также образуется фрагмент с m/z 132.1. Действительно, при анализе чистого препарата или образцов мочи добровольцев после однократной инъекции мельдония (2-5 мл препарата с концентрацией 100 мг/мл) для SRM-перехода 147.1>132.1 регистрируется пик, интенсивность которого позволяет использовать его для идентификации. Однако при анализе образцов мочи после употребления молока, содержащего продукты биотрансформации препарата Эмидонол^®, интенсивность пика данного перехода на 2-3 порядка ниже, чем пиков других переходов; пик регистрируется только в образцах мочи с максимальными концентрациями (от 100-150 нг/мл), отобранных спустя 4-12 ч после употребления больших доз молока, полученного от утренней дойки, и отобранных через 6-9 ч после употребления образцов вечерней дойки. Не исключено, что при употреблении небольших количеств молока пик SRM-перехода 147.1>132.1 будет проблематично регистрировать или он будет отсутствовать вовсе [10]. Регистрация тех или иных пиков зависит от стадии выведения мельдония.

Если оценивать полученные результаты по критериям ВАДА, то мельдоний, являющийся продуктом биотрансформации препарата Эмидонол^®, надежно определяется в образцах мочи добровольцев спустя 4-12 ч после употребления разовой дозы 900 мл молока для следующих 5 SRM-переходов 147.1>147.1 (15), 147.1>132.1 (17), 147.1>59.1 (17), 147.1>58.1 (17), 147.1>42.1 (60) (рис. 4). Спустя более 12 ч пик SRM-перехода 147.1>132.1 уже не детектируется. Следует отметить, что пики 2 других SRM-переходов 147.1>147.1 и 147.1>42.1 регистрировались до 14-15 ч (данные не показаны), однако далее их использование для идентификации становится проблематичным из-за высокой интерференции и наличия посторонних пиков. Как уже отмечалось ранее, самыми стабильными и долгоживущими переходами являются 147.1>59.1 и 147.1>58.1. Их пики надежно идентифицируются в образцах мочи спустя 36-40 ч после приема больших доз молока (рис. 5), а у одного добровольца даже спустя 42 ч. Для определения мельдония в следовых количествах предпочтительнее использовать метод ВЭЖХ-МС/МСВР.

S. Cristoni и соавт. указывают [10], что согласно директиве Европейского союза 2002/657/EC⁴ для веществ, относящихся к Группе А (обладающих анаболическим эффектом и запрещенных веществ), таких как мельдоний, вещество должно быть идентифицировано как минимум с использованием 4 точек (SRM-переходов), как приводится в работе C. Görgens и соавт. [7], что противоречит методологии, применяемой в антидопинговом анализе, где используются 3 точки (ионы с m/z 58,0654, m/z 59,0732 и m/z 147,1133). В нашей работе для обнаружения мельдония использовалось 5 SRM-переходов, хотя использование даже 3 не противоречит TD2023IDCR³.

⁴ Директива Европейского союза 2002/657/EC. [Интернет­ресурс] URL: https://fishquality.ru/assets/files/Documents%20on%20activities/Legislation/EU/Решение%202002­657.pdf (дата обращения: 30.08.2024).

Согласно данным, приведенным A. Temerdashev и соавт. [5], даже термическая обработка молока не гарантирует полного избавления от мельдония. Исходя из результатов исследования авторы отмечают, что и свежее, и пастеризованное молоко содержит мельдоний, а его содержание в одном и том же образце молока до и после пастеризации может различаться примерно в 2 раза. Также отмечено, что запрещенный модулятор метаболизма может определяться в образцах молока коров спустя около 7 дней после окончания курса препаратом Эмидонол^®.

S. Guddat и соавт. изучали профиль выведения мельдония после употребления добровольцами в течение одного и 5 последовательных дней пастеризованного молока с добавленным мельдонием (50 мкг в 100 мл) [6]. Авторы установили, что эффекты накопления при употреблении низких доз мельдония в течение 5 дней подряд были незначительными (примерно в 2,5 раза по сравнению с однократным приемом) и спустя 24 ч образцы мочи показывали отрицательный результат (сопоставимый с бланковой мочой). Однако, согласно нашим данным, неоднократный прием больших количеств молока, контаминированного мельдонием, может дать существенный эффект.

Результаты проведенных нами исследований показывают, что при употреблении больших количеств контаминированного молока оценочные концентрации мельдония в моче превышают минимальный требуемый уровень определения (MRPL) в 100 нг/мл. Анализируя представленные выше данные, можно с уверенностью сказать, что употребление в больших количествах свежего непастеризованного молока коров, отобранного по окончании 15-дневного курса ветеринарным препаратом Эмидонол^® 10%, гарантированно приведет к неблагоприятному результату анализа в соответствии с критериями ВАДА в течение 12 ч [при сканировании в режиме SRM с использованием 5 переходов - 147.1>147.1 (15), 147.1>132.1 (17), 147.1>59.1 (17), 147.1>58.1 (17), 147.1>42.1 (60)] и в течение около 36-40 ч [при сканировании в режиме SRM с использованием 2 переходов - 147.1>59.1 (17), 147.1>58.1 (17)].

⁵ Технический документ ВАДА TD2022MRPL. [Интернет­ресурс] URL: https://www.wada­ama.org/sites/default/files/2022­01/td2022mrpl_v1.1_eng_0.pdf (дата обращения: 05.08.2024.

Заключение

В ходе впервые проведенных исследований по изучению образцов мочи добровольцев после однократного употребления большого количества молока коров, прошедших курс ветеринарным препаратом Эмидонол^® 10%, было установлено, что максимальные концентрации мельдония в моче могут достигать 160-400 нг/мл спустя 5-10 ч после однократного приема 900 мл, что значительно превышает уровень MRPL, равный 100 нг/мл. Показано, что неблагоприятный результат анализа в соответствии с критериями ВАДА при определении мельдония методом ВЭЖХ-МС/МС может регистрироваться в зависимости от применяемых условий сканирования в режиме SRM даже спустя 40-42 ч после употребления молока. Полученные данные свидетельствуют о том, что, по-видимому, следует установить некоторый период ожидания для продуктивных сельскохозяйственных животных на период проведения терапевтического или профилактического курса вышеуказанным ветпрепаратом, а профессиональным спортсменам следует воздерживаться от употребления большого количества свежего коровьего молока во избежание сдачи положительного результата допинг-теста на мельдоний.

Литература

1. Васильев А.А., Галатдинова И.А., Жигалова Ю.А. Ихтиотоксикологические свойства эмидонола 20% // Вестник АПК Ставрополья. 2015. № 1. С. 13-15.

2. Государственный реестр лекарственных средств для ветеринарного применения (перечень лекарственных препаратов прошедших государственную регистрацию) [Электронный ресурс]. URL: https://fsvps.gov.ru/files/gosudarstvennyj-reestr-lekarstvennyh-sredstv-dlja-veterinarnogo-primenenija-perechen-lekarstvennyh-preparatov-proshedshih-gosudarstvennuju-registraciju/ (дата обращения: 17.07.2024).

3. Jędrejko K., Catlin O., Stewart T., Muszyńska B. Mexidol, Cytoflavin, and succinic acid derivatives as antihypoxic, anti-ischemic metabolic modulators, and ergogenic aids in athletes and consideration of their potential as performance enhancing drugs // Drug Test. Anal. 2024. Feb 25. DOI: https://doi.org/10.1002/dta.3655

4. The 2024 List of prohibited substances [Электронный ресурс]. URL: http://rusada.ru/upload/iblock/836/drtkaf3eckdo1jrnjxacdwqkbm054m1n/Запрещенный%20список%202024%20(1).pdf (дата обращения: 17.07.2024).

5. Temerdashev A., Azaryan A., Dmitrieva E. Meldonium determination in milk and meat through UHPLC-HRMS // Heliyon. 2020. Vol. 6, N 8. Article ID e04771. DOI: https://doi.org/10.1016/j.heliyon.2020.e04771

6. Guddat S., Görgens C., Sobolevsky T., Thevis M. Meldonium residues in milk: a possible scenario for inadvertent doping in sports? // Drug Test. Anal. 2021. Vol. 13, N 11-12. Р. 1906-1910. DOI: https://doi.org/10.1002/dta.3145

7. Görgens C., Guddat S., Dib J., Geyer H., Schänzer W., Thevis M. Mildronate (Meldonium) in professional sports - monitoring doping control urine samples using hydrophilic interaction liquid chromatography - high resolution/high accuracy mass spectrometry // Drug Test. Anal. 2015. Vol. 7, N 11-12. Р. 973-979. DOI: https://doi.org/10.1002/dta.1788

8. Stuart M., Schneider C., Steinbach K. Meldonium use by athletes at the Baku 2015 European Games // Br. J. Sports Med. 2016. Vol. 50, N 11. Р. 694-698. DOI: https://doi.org/10.1136/bjsports-2015-095906

9. Pușcaș A., Buț M.-G., Vari C.-E., Osz B.-E., Ștefănescu R., Filip C. et al. Meldonium supplementation in professional athletes: career destroyer or lifesaver? // Cureus. 2024. Vol. 16, N 7. Article ID e63634. DOI: https://doi.org/10.7759/cureus.63634

10. Cristoni S., Vitarelli F., Spiti S., Brambilla M., Larini M., Calabrone L. et al. Unraveling the complexity of anti-doping analysis: reassessing meldonium detection and doping verdicts in a case study // Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci. 2023. Vol. 27, N 6. Suppl. Р. 114-118. DOI: https://doi.org/10.26355/eurrev_202312_34695

Материалы данного сайта распространяются на условиях лицензии CC BY-NC-ND 4.0 (Creative Commons Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International)

© ООО Издательская группа «ГЭОТАР-Медиа». Использование текстового и иллюстративного материала данного издания для обучения любых систем искусственного интеллекта, включая машинное обучение и нейросети, запрещено без письменного разрешения правообладателя.